innovativ tilgang til interstitiel Cystitis: vaginale pessarer indlæst Diasepam–en foreløbig undersøgelse

abstrakt

blæresmerter er en karakteristisk lidelse af interstitiel cystitis. Diasepam er kendt for sin antispasmodiske aktivitet i behandlingen af muskelhypertonus. Formålet med dette arbejde var at udvikle og karakterisere vaginale pessarer som et intravaginal leveringssystem af diasepam til behandling af interstitiel cystitis. Især blev udførelsen af to typer formuleringer, med og uden beta-glucan, sammenlignet. Især blev fremstillingen af pessarer i henhold til den modificerede Pharmacopeia-protokol rapporteret om opsætningen af analysemetoden til bestemmelse af diasepam, pH-evaluering, opløsningsprofil og fotostabilitetsanalyse. Resultaterne viste, at den modificerede protokol tillod opnåelse af optimale vaginale pessarer uden luftbobler med god konsistens og håndtering og med gode pH-profiler. For at bestemme diasepam-mængden blev kalibreringskurver med gode korrelationskoefficienter opnået ved den spektrofotometriske metode ved anvendelse af placebo-pessarer som matrice med tilsætning af diasepam-standardopløsning. Denne metode blev påvist fornuftig og nøjagtig til bestemmelse af mængden af lægemiddel i batches. Opløsningsprofiler viste en fuldstændig frigivelse af diasepam lige efter 15 minutter, selvom beta-glucan-pessarer frigav lægemidlet mere gradvist. Endelig blev en mulig lægemiddelfotodegradering efter forværret UV-synlig eksponering evalueret.

1. Introduktion

interstitiel cystitis (IC), også kendt som smertefuldt blæresyndrom, er en foruroligende, kronisk blæreforstyrrelse af ukendt årsag med symptomer på smerte, tryk eller ubehag relateret til blæren og normalt ledsaget af et hyppigt og presserende behov for at urinere dag og nat . Smerter eller ubehag er det vigtigste og svækkende symptom på denne lidelse. Det kan opleves som ubehag eller ømhed eller irritation eller brændende fornemmelse i blæren, i form af spasmer i eller omkring blæren, eller stikkende eller brændende vaginal smerte eller simpelthen en følelse af pres på eller i blæren eller en følelse af fylde, selv når der kun er lidt urin i blæren. IC smerter kan stamme ikke kun fra blæren, men også fra nærliggende muskler, nerver og endda henvist smerte fra andre dele af kroppen . Med tiden lærer de fleste patienter den subtile forskel i symptomer mellem en IC-opblussen forårsaget af direkte blæreirritation (dvs., kost) versus en muskelspasmer (dvs.køn, kørsel i bil osv.). Irritation af blærevæggen har en tendens til at skabe mere af en skarp, intens smerte. Bækkenbundens muskelspasmer skaber en dybere, tungere brændende fornemmelse, der kan gøre siddende mere ubehageligt. Nervesmerter kan være mere elektriske, varme eller sviende i naturen. Hver potentiel kilde til smerte har sine egne symptomer og behandlinger.

på trods af al den forskning og undersøgelser, der er udført, er der endnu ikke fundet nogen mulighed for at helbrede denne sygdom, og der er heller ikke et enkelt lægemiddel, der er effektivt hos alle patienter. Ikke desto mindre er der mange forskellige muligheder at prøve. Behandling af IC bør fokusere på smerte og urologiske symptomer som haster og hyppighed. Imidlertid bør smertebehandling spille en vigtig rolle . Hvis smerten er meget alvorlig og ikke reagerer på standardbehandling, kan en henvisning til Smerteklinik være tilrådeligt.

faktisk er mange lægemiddelklasser blevet administreret til smertebehandling. Den foretrukne behandling for akut behandling af svære smerter. BSD ‘ er har en hurtig indsættende virkning, når de først er leveret i centralnervesystemet og er sikre . Dette er en af de mest almindelige typer af medicin, der anvendes til behandling af sygdomme. Det har dog en kort virkningsvarighed og bør gives intravenøst eller rektalt. Især er absorptionen efter oral administration af tabletter normalt langsommere end efter parenteral eller rektal administration . I stedet bør doseringsformer designet til rektal administration ikke forårsage irritation, bør vise god tilbageholdelse i den nedre del af tyktarmen og bør være passende nok til at blive accepteret af patienten.

ifølge disse overvejelser undersøgte Balkis frigivelsen af diasepam fra forskellige konventionelle og hule suppositoriebaser, og han konkluderede, at de bedste resultater blev opnået ved anvendelse af glycerol-gelatine og glycerol-PEG1540 som vandopløselige baser .

i øjeblikket ordinerer nogle læger suppositorier eller tabletter til vaginal diasepam (Valium) for at hjælpe med at lindre smerten ved dysfunktion i bækkenbunden, interstitiel cystitis, vulvarsmerter og seksuel smerte. Dette forårsager mindre døsighed som en bivirkning end oral valium, men ikke desto mindre kan det stadig producere mild sedation . Dosering er normalt 5-10 mg valium sammensat (i en paraffinbase), der starter en gang om natten og titrerer. En alternativ vej til rektal administration af diasepam kan betragtes som den intravaginale vej for at overveje supplerende behandling af blæresmerter i interstitiel cystitis. I betragtning af alle de ovennævnte fakta er diasepambelastede vaginale pessarer formuleret og karakteriseret for at foreslå en innovativ terapeutisk tilgang til smertefulde symptomer, karakteristika ved interstitiel cystitis .

især er diasepambelastede vaginale pessarer, beskrevet i denne undersøgelse, formuleret med beta-glucan-tilsætning som aktivt hjælpestof. Ifølge litteraturen forhindrer og behandler beta-glucan mucositis gennem sårheling og omorganisering af væv , og dette aspekt er meget interessant, da patienter, der er ramt af interstitiel cystitis, viser et beskadiget slimhindevæv med sårdannelser.

2. Materialer og reagenser

diasepampulver blev leveret af FIS-SPA (Italien); henholdsvis purpurglucan (CM-glucangranulat, SD = 0,85) og gelatine (maskestørrelse 20, batch 4767) blev købt af Mibelle Biochemistry og Lapi-Gelatine s.p.A. Diasepam blev opnået med officiel tilladelse. Alle andre materialer var af analytisk kvalitet.

2.1. Forberedelse af vaginale pessarer

Vaginalbelastede pessarer blev fremstillet ved at hydrere gelatine i vand over natten. Gelatine blev opvarmet i et ultralyd termisk bad, ved 85 liter C, indtil fuldstændig fusion. Samtidig er glycerol og den vandige opløsning af cholagogue blevet opvarmet separat (ved 85 cholagogue C) og til sidst blandet sammen. blandingen blev tilsat til smeltet gelatine og omrørt kraftigt for at opnå en homogen formulering. Endelig blev der tilsat DSP-pulver, og den opnåede formulering blev sonikeret og støbt i formene. Placebo-pessarer er også blevet forberedt med den samme procedure uden DSP-afhængighed. Placebo og indlæste pessarer blev fremstillet i henhold til European Pharmacopeia (7.udgave). Alle batcher, placebo og indlæst, blev opbevaret ved 4 kvik C, og de blev fremstillet i tre eksemplarer.

i tabel 1 blev batchsammensætning rapporteret.

2.2. Lægemiddelindhold i vaginale pessarer

DSP-indhold blev bestemt ved anvendelse af spektrofotometrisk teknik ved ekstern standardmetode. Analysen blev udført med UV-synligt spektrofotometer (Spektrofotometer UV-Vis Agilent 8453). Kalibreringskurven blev opnået ved at overveje placeboprøver og fem forskellige planlagte koncentrationer af DSP (6,40–87,06 liter/mL).

indlæst pessary (3,6 g) blev overført til hætteglas, og 4 mL absolut ethanol blev tilsat, og hætteglasset blev anbragt i ultralydsbadet ved 37 liter C indtil fuldstændig blødgøring. Prøverne blev omrørt ved 600 o / min i 15 minutter for at tillade gelatineudfældning, og derefter blev 1 mL af suspensionen overført til et mikrotube centrifugeret ved 14.000 rpm, ved 24 liter C i 10 minutter for at sikre gelatineseparation til mikrotubernes bund.

kolorimetrisk analyse blev udført ved tilsætning af 0,5 mL supernatant, 1 mL 3,5-dinitrobenssyre og 0,5 mL 7 M natriumhydroksid . Prøveens absorbans blev målt ved 530 nm.

2.3. 6163 >

for at evaluere lægemiddelhomogen fordeling i pessarer blev forskellige dele af hver prøve opsamlet: base, krop og topmøde. Især blev 1,2 g af hver del tilsat til absolut ethanol. Spektrofotometrisk analyse blev bestemt ved den ovenfor beskrevne eksperimentelle protokol.

2.4. Evaluering af pH i vaginale formuleringer

alle prøver, indlæst og placebo, blev gennemvædet i 2 mL phosphatbufferopløsning, pH 4,2 ved 37 kg C. Efter planlagte tidspunkter (15, 60 minutter og 4, 6, 24 timer) blev ph-målinger udført for at evaluere den mulige ændring af pH-inkubationsmedium.

2.5. In Vitro-Frigivelsesundersøgelse

i vores laboratorium blev et modificeret in vitro-testapparat passende realiseret (Figur 1) for at simulere intravaginale tilstande og for at diskriminere formuleringens ydeevne. Til dette formål blev hætteglas tildelt egnet designet rotor for at garantere planetariumbevægelse. Især blev hætteglas fastgjort til konisk rotor med en veldefineret vinkel. Eksperimentet blev sat op i et vandbad ved K. C.

Figur 1

in vitro-frigivelsesapparater: instrument ved rotationsbevægelse for at simulere mekanisk belastning i et vaginalt miljø.

belastede pessarer (3,6 g) blev hældt i et hætteglas i nærvær af phosphatbuffer pH 4,2 (2 mL) udsat for hastighed ved 37 omdr. / min. På planlagte tidspunkter (2, 5, 7, 15, 25, 35 minutter) blev væskefasen trukket tilbage og omrørt i få minutter for at garantere fuldstændig dispersion af diasepam. Lægemiddelfrigivelsesanalyser blev udført ved den ovenfor beskrevne spektrofotometriske metode. Især blev 1 mL absolut ethanol tilsat til 0,5 mL væskeprøve. Efter omrøring og centrifugering blev 0,5 mL af supernatanten trukket tilbage for at udføre kolorimetrisk analyse. Tilbagetrukne alikvoter blev analyseret spektrofotometrisk ved 530 nm (Spektrofotometer UV-Vis Agilent 8453). Alle forsøgene blev udført i tre eksemplarer, og gennemsnitsværdier blev præsenteret.

2.6. Fotostabilitetsstudie

ifølge European Pharmacopoeia 7.udgave er photosensible. Af denne grund blev pessarer underkastet kunstigt sollys af Suntest +II (Atlas).

analysen blev udført for at evaluere den mulige interaktion mellem emballage og formulering. Prøverne blev opbevaret i form (primær emballage) eller i glas (fremstillingspakning).

ved afslutningen af undersøgelsen blev prøver i Suntest sammenlignet med standarder opbevaret ved stuetemperatur.

instrumentet blev oprettet i henhold til standard europæisk procedure og præcist til følgende parametre: tid: 4 timer svarende til 192 timer sollys, bestrålingskontrol: 300-800 nm, bestråling m / m2: 750, stuetemperatur: 35 liter C, sort standard temperatur( BST): 45 liter C.

3. Resultater og diskussion

Amnesic, men det administreres også til behandling af søvnløshed, feberkramper, status epilepticus og alkoholabstinenssymptomer. Det kunne administreres via forskellige ruter: oralt, IV-injektioner, rektale opløsninger, rektale geler og suppositorier. Imidlertid oral og IV rute, selvom de udgør en enkel og hurtig indgivelsesmåde, viser den første uregelmæssig og langsommere absorption, den anden er i stedet bundet af tilstedeværelsen af medicinsk personale. På baggrund af disse antagelser og bevidstheden om, at en topisk formulering, såsom suppositorier og vaginale pessarer, kunne have en hurtig absorption og hurtig adgang til centralnervesystemet, har et ekspertteam af urologer foreslået vaginale pessarer indlæst diasepam, som praktisk, effektiv og mangler bivirkninger administrationsform til behandling af interstitiel cystitis. Imidlertid, en lavere dosis af lægemidlet er blevet overvejet, fordi det lokale bioetiske udvalg fremhævede kravet, i en klinisk i-fase, at begynde med en lav dosis for at tilvejebringe hæmatisk lægemiddeltitrering, evaluering og overvågning af dets kliniske og bivirkninger.

ifølge Pharmacopoeia blev to forskellige formuleringer af pessarer med og uden beta-glucan overvejet og oprettet. Beta-glucan er et polysaccharid med signifikant terapeutisk profil. Antioksidant, antiinflammatoriske og sårhelende egenskaber er blevet tilskrevet dette polysaccharid, og dette repræsenterer videnskabelig rationel om dets anvendelse i vaginal pessaryformulering.

interstitiel cystitis er faktisk karakteriseret ved ændringer af blærevæggen med rødme og ulcerationer, som beta-glucan kunne kunne helbrede. Imidlertid bidrager beta-glucan også til at give mere konsistens til formulering.

talrige eksperimentelle parametre gør det muligt at opnå standardiserede og reproducerbare vaginale formuleringer: hydration temperatur og tid af gelatine, sonikering tid, fremstillingstemperatur, diasepam tilsætning, og pessary opbevaring. Opsætningen af forberedte formuleringer er udført i henhold til de procesbetingelser, der er rapporteret i tabel 2.

Opsætningsfase evaluering af parametre
75 liter C garanterer en fuldstændig fusion af alle hjælpestoffer og fravær af aggregater
fremstilling sonikering undgår dannelse af luftbobler (figur 2 (a)), der bidrager til opnåelse af en homogen dispersion af diasepampulver i smeltet matrice
formfyldning er udført ved analytisk balance for at ensartet masse indhold på omkring 3,6 gram
opbevaring pessarer må ikke udsættes for sollys, og de skal opbevares ved 4 kg C for at bevare diasepam-aktivitet
tabel 2
parametre for formuleringsprocessen i fremstillings-og lagringsfasen.

vaginale systemer, her foreslået, selvom de var enkle at reproducere, blev karakteriseret fra en matrice mere og mere kompleks: en lille mængde diasepam suspenderes i en blanding af gelatine, vand, glycerin eller/og beta-glucan. Derfor skal formulator beskæftige sig med to kritiske aspekter: lægemiddel fordeles ikke homogent i matricen på grund af dets moderate opløselighed i basismatricen. Det andet aspekt er, at det er vanskeligt at bestemme den nøjagtige mængde aktiv til stede i formulering.

i figur 2 blev pessarer opnået med og uden tilsætning af beta-glucan rapporteret. Billeder viser, hvordan forskellige formuleringer tilsyneladende kan virke ens på grund af gelatinetilstedeværelse, der giver batcherne en karakteristisk gennemsigtig og gul farve. Det er dog muligt at observere flere luftbobler i den anden batch.

endelig er det vigtigt at understrege, at der for alle partier er registreret et vandtab, der er korreleret med temperaturopbevaring. En vanddampudveksling mellem matricen og miljøet blev antaget.

3.1. Lægemiddelindhold i vaginale pessarer

for at evaluere diasepam indlæst i pessarer blev der oprettet en spektrofotometrisk metode. Den foreslåede metode til aktiv bestemmelse i tabletterne og ampullerne blev passende tilpasset vaginale formuleringer. Ifølge denne kolorimetriske metode giver diasepam intenst rødfarvet produkt, når det reagerer med 3,5-dinitrobenssyre i alkalisk medium. Det røde kompleks kaldes Meisenheimer-kompleks, og reaktionen kaldes Janovsky-reaktion .

tre forskellige kalibreringskurver blev monteret. I figur 3(A) og 3 (B) er standardopløsninger og standardopløsning blevet sammenlignet med flere placebobatcher (a-batcher eller B-batcher). Ved at sammenligne kurver er det muligt at observere, at matricen, fremstillet af gelatine, beta-glucan og glycerin, er i stand til at interferere med diasepam bestemmelse. Faktisk i begge figurer, kurveprofiler er ikke parallelle, men de har tendens til at krydse. Desuden viser kurver med standardtilsætninger til pessarer korrelationskoefficienter over henholdsvis 0,9954 og 0,9937.

kalibreringskurver anvendes til at bestemme: Tabel 3 rapporterer lægemiddelprocent af gelatine-og beta-glucanbatcher, der viser henholdsvis over og undervurdering af lægemidlet. I det første tilfælde forklarer tab af vand og hjælpestof, der henviser til fremstillings-og opbevaringsfasen, en højere procentdel af diasepam. På den anden side kunne de lavere i beta-glucanprøver forklares ved at antage, at polysaccharidstruktur binder lægemiddel.

procentdel ensartethed i indhold (%)
Top Central bund
gelatine batch 32% 31% 37%
Beta-glucan batch 33% 33% 34%
tabel 3
belastet virkningsgrad ( % ) og vurdering af fordelingen af lægemidlet i batches af gelatine og beta-glucan.

lægemidlet er et vanduopløseligt lægemiddel, og dets inkorporering i vaginal formulering afhænger af fremstillingsprocessen. For at opnå optimal belastning blev flere faktorer, såsom hjælpestoffer og procesparametre, overvejet. Det blev især observeret, at 2% af beta-glucan øger viskositeten af smeltet masse, og det garanterer derfor en homogen fordeling af diasepampulver. Som det er rapporteret i tabel 3, viser gelatinepessarer faktisk en højere diasepam-procentdel på deres bund på grund af lægemiddeludfældningstendens. Denne effekt kan relateres til lav viskositet af denne formuleringstype.

efter lægemiddeltilsætning er sonikering en af de vigtigste procesparametre, der bidrager til at undgå dannelse af lægemiddelaggregater og for at sikre en god lægemiddelfordeling.

3.2. pH-evaluering af vaginale formuleringer

ifølge mange forskere og klinikere forstærkes neural modulering og transmission af smerter i IC ved direkte stimulering i miljøer med lav pH. I løbet af de sidste 20 år eller mere er alkaliserende midler til styring af cystitis-lignende symptomer blevet brugt med gode resultater. For nylig revurderede flere undersøgelser forholdet mellem urin–pH og cystitis-symptomer og konkluderede, at der ikke var noget forhold mellem dem for et interval mellem pH 5,0-8,0. I lyset af de tidligere videnskabelige diskussioner er det således ekstremt vigtigt i præklinisk fase at bestemme pH-ændringer i topisk formulering under deres opdeling.

i figur 4 rapporteres pH-værdier for pessaries inkubationsmedium. Fra tallene er det tydeligt, at pH i alle formuleringer opretholder, lige efter 15 minutter, værdier til ~5. Disse svagt syreværdier tilskrives gelatine, opnået ved alkalisk hydrolyse. Faktisk viser de samme tal en konstant profil indtil 24 timer.

figur 4

pH-evaluering af pessarbatcher på planlagte tidspunkter, inkuberet i phosphatbuffer 4.2.

3.3. In vitro-Frigivelsesundersøgelse af pessar

in vitro-frigivelsesundersøgelse blev udført under anvendelse af phosphatbuffer pH 4,2 som foreløbigt opløsningsmedium for at simulere fysiologisk pH i det vaginale miljø.

Frigivelsesprofiler af diasepam fra vaginale pessarer er vist i figur 5. Som det er muligt at observere fra tallene, frigiver beta-glucan og gelatinebatcher fuldstændigt lægemidlet henholdsvis 15 og 25 minutter. 40% diasepam lige efter 2 minutter mod ca. 8% af beta-glucanprøverne. Figur 5 viser også, at beta-glucan sandsynligvis på grund af mekanismen for lægemiddelinddragelse i polysaccharidnetværk tillader en gradvis frigivelse af lægemidlet fra matricen ifølge den foregående diskussion. Desuden opretholder gelatinebatcher efter plateaupræstation høj profil (~100%), mens beta-glucan viser værdier fald (80%), sandsynligvis på grund af en antaget lægemiddel-polysaccharidinteraktion.

figur 5

kumulative frigivelsesprofiler i bufferfosfat-pH 4.2.

Lægemiddelfrigivelsesprofiler er aftalt med tidligere disaggregeringstest (data ikke rapporteret). Faktisk opdeles beta-glucan-pessarer fuldstændigt efter 30 minutter, 10 minutter mere end gelatine.

3.4. Fotostabilitetsstudie

lysfølsomhed, der er forbundet med bendiasepiner, er for nylig blevet rapporteret . ICH harmoniserede Trepartsretningslinje 10 og nyere FDA-udkast til vejledning angiver, at lystest skal være en integreret del af stresstesten. Derfor er det af interesse at teste stabiliteten af diasepam fotokemiske stressbetingelser. Gallardo et al. observeret, at der efter lysudstilling dannedes nedbrydningsprodukter. På baggrund af disse overvejelser er alle vaginale formuleringer blevet underkastet UV-synlig bestråling for at verificere screeningseffekten af skimmel på pessary og, så, på lægemiddel.

som det er muligt at observere i tabel 4, uafhængigt af batchtype, alle prøver, der er indsendt til accelererede forhold og opbevaret i skimmel, viser de et fald i lægemiddelmængden på grund af nedbrydningskraften af bestrålinger på diasepam, men også på grund af en mulig diasepam-emballageinteraktion. I Pharmacopeia rapporteres det, at polyvinylchlorid, når det er en bestanddel af infusionsemballage, kan interagere med diasepam og følgelig adsorbere det.

standardtilstand accelererede forhold
Gelatineprøve formulering
i polymerform
formulering i glas (standardprøve)
Beta-glucanprøve formulering i polymerform
formulering i glas (standard prøve)
Tabel 4
Fotodegradering af diasepam efter UV-stråleeksponering: procentdel af lægemiddel i partier, der er opbevaret i skimmel og i partier, der er opbevaret i fremstillingsbeholder (borosilikatglas).

endelig er det interessant at understrege, at beta-glucanprøver har opretholdt deres struktur og form i slutningen af analysen, i stedet forekommer gelatinepessarer fuldstændigt smeltede, sandsynligvis på grund af manglen på teksturmiddel, som beta-glucan. Dette bekræfter, at polysaccharid garanterer en konsistens og en langsom frigivelse af lægemiddel fra formulering, netop observeret ovenfor.

4. Konklusioner

i denne undersøgelse er et interessant vanduopløseligt lægemiddel til blærepine kur i interstitiel cystitis terapi blevet indlæst i en topisk formulering, enkel at administrere og uden bivirkninger på det centrale system.

i alternativ til klassisk formel rapporteret til officiel Pharmacopeia antyder dette arbejde vaginale pessarer med tilsætning af polysaccharid med bemærkelsesværdige terapeutiske og teknologiske egenskaber. Valget af polysaccharidtilsætning synes at bidrage med succes til opnåelse af håndtering af pessarer med gode organoleptiske egenskaber, når lægemidlet er homogent fordelt i en matrice.

desuden tillader lægemiddelfrigivelsestestapparater, der er designet i vores laboratorier, at simulere mekanisk stress i et vaginalt miljø. Dette apparat præsenterer især forskellige fordele med hensyn til officiel test. Først og fremmest mængden af opløsning medium kræves, og systemet geometri forsikre in vivo betingelser. Desuden kan selv ekstremt lav lægemiddelmængde under disse forhold let kvantificeres.

på trods af at opløsningsmediumvolumen er lille, men sammenhængende med litteraturen, opløste pessarer og frigav lægemidlet fuldstændigt inden for 30 minutter, hvilket sandsynligvis garanterer en hurtig farmakologisk effektprøver ændring med hensyn til organoleptiske egenskaber og farmakologisk effektivitet.

de lovende resultater opnået i denne undersøgelse repræsenterer muligheden for at udvikle et klinisk studie, når det er muligt at evaluere dets terapeutiske virkning på interstitielle cystitis patienter.

interessekonflikt

dette arbejde, her præsenteret, har ingen interessekonflikt.

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.