間質性膀胱炎に対する革新的なアプローチ:ジアゼパムを装填した膣ペッサリー–予備研究

要約

膀胱痛は間質性膀胱炎の特徴的な障害である。 ジアゼパムは筋肉hypertonusの処置の鎮痙的な活動のためによく知られています。 この研究の目的は、間質性膀胱炎の治療のためのジアゼパムの膣内送達システムとしての膣ペッサリーを開発し、特徴付けることであった。 特に,β-グルカンの有無にかかわらず,二つのタイプの製剤の性能を比較した。 特に,ペッサリーの調製,修正薬局方プロトコールに従って,ジアゼパムを決定するための分析法のセットアップ,ph評価,溶解プロファイル,および光安定性アッセイを報告した。 結果は、変更されたプロトコルは、良好な一貫性と取り扱いと良好なpHプロファイルと、気泡なしで、最適な膣ペッサリーを得ることを可能にす ジアゼパム量を決定するために,ジアゼパム標準溶液を添加したプラセボペッサリーをマトリックスとして用いて,良好な相関係数を有する検量線を分光光度法により得た。 この方法は、バッチ内の薬物の量を決定するために賢明かつ正確であることが実証された。 溶解プロファイルは、β-グルカンpessariesがより徐々に薬物を放出した場合でも、ちょうど15分後に完全なジアゼパム放出を示した。 最後に,悪化したUV可視博覧会後の薬物光分解の可能性を評価した。

1. はじめに

間質性膀胱炎(IC)は、痛みを伴う膀胱症候群としても知られており、原因不明の悲惨な慢性膀胱障害であり、膀胱に関連する痛み、圧迫、または不快感の症状を伴い、通常は昼夜を問わず頻繁かつ緊急に排尿する必要がある。 痛みや不快感は、この障害の最も重要で衰弱させる症状です。 それはぼうこうに少しだけ尿がある時でさえぼうこうの痙攣の形でぼうこうの不快か柔軟性または苛立ちまたは燃える感覚として、ぼうこうのま ICの痛みは、膀胱からだけでなく、近くの筋肉、神経、さらには身体の他の部分からの言及された痛みからも発生する可能性があります。 時間と共に、ほとんどの患者は直接ぼうこうの苛立ちによって引き起こされるICの火炎信号間の徴候の微妙な相違を学びます(すなわち。、食事療法)対筋肉痙攣(すなわち、性、車の運転、等。). 膀胱壁の刺激は、鋭い、激しい痛みの多くを作成する傾向があります。 骨盤底筋痙攣は、より不快に座って作ることができ、より深く、重い灼熱感を作成します。 神経の痛みは、より電気的で、熱く、または本質的に焼け付くようなものになる可能性があります。 痛みの各潜在的な原因は、独自の症状と治療法を持っています。

実施されたすべての研究と研究にもかかわらず、この疾患を治癒する可能性はまだ見出されておらず、すべての患者に有効な単一の薬物も存在し それにもかかわらず、試みるべき多くの異なった選択がある。 ICの治療は、痛みや緊急性や頻度などの泌尿器科の症状に焦点を当てるべきである。 しかし、疼痛管理は重要な役割を果たすべきである。 苦痛が非常に厳しく、標準的な処置に答えなければ苦痛医院の紹介は勧められるかもしれません。

実際には、疼痛治療のために多くの薬物クラスが投与されている。 ベンゾジアゼピン(BZDs)は、重度のとう痛の急性管理のための選択の治療法であると考えられている。 BZDは、一度中枢神経系に送達されると迅速に作用を開始し、安全である。 ジアゼパムは、特に、抗けいれん薬、抗不安薬、鎮静薬、筋弛緩薬および記憶処理の特性を有する長時間作用型ベンゾジアゼピンである。 しかし、それは作用の持続時間が短く、静脈内または直腸内に与えられるべきである。 特に、錠剤の経口投与後の吸収は、通常、非経口投与または直腸投与後よりも遅い。 代わりに、直腸投与のために設計された剤形は、刺激を引き起こしてはならず、大腸の下部領域で良好な保持を示し、患者が受け入れるのに十分に適

これらの考察によれば、バルキスは異なる従来型および中空型座薬基剤からのジアゼパムの放出を研究し、グリセロール-ゼラチンおよびグリセロール-PEG1540を水溶性基剤として用いて最良の結果が得られたと結論した。

現在、一部の医師は、骨盤底機能不全、間質性膀胱炎、外陰部の痛み、および性的痛みの痛みを和らげるために膣ジアゼパム(バリウム)坐剤または錠剤を これにより口頭valiumより副作用としてより少ない眠気を引き起こしますが、それにもかかわらずまだ穏やかなsedationを作り出すかもしれません。 適量は通常5-10mgのバリウム混合されて(パラフィンの基盤で)、一度毎晩始まり、滴定します。 ジアゼパムの直腸投与への代替経路は、間質性膀胱炎における膀胱痛の補助的治療を考慮するために、膣内経路と考えることができる。 上記のすべての事実を考慮して、ジアゼパムによって荷を積まれる腟のpessariesは苦痛な徴候、間質性膀胱炎の特徴のための革新的な治療上のアプローチを提

特に、この研究に記載されているジアゼパム負荷膣ペッサリーは、活性賦形剤としてβ-グルカンを添加して処方されている。 文献によると、β-グルカンは創傷治癒および組織再編成を通じて粘膜炎を予防および治療し、間質性膀胱炎に罹患した患者は潰瘍を伴う損傷した粘液組織を示すので、この側面は非常に興味深い。

2. 材料および試薬

ジアゼパム粉末(DZP)はFIS-SPA(イタリア)によって提供され、β-グルカン(CM-グルカン顆粒、SD=0.85)およびゼラチン(メッシュサイズ20、バッチ4767)ペレットは、それぞれMibelle Biochemistryから購入され、Lapi-Gelatine s.p.a.ジアゼパムは公式承認を得た。 他のすべての材料は分析グレードのものであった。

2.1. DZP膣ペッサリーの調製

膣負荷ペッサリーは、一晩水にゼラチンを水和することによって調製した。 ゼラチンを、完全に融合するまで、8 5℃の超音波熱浴中で加熱した。 同時に、グリセロールとβ-グルカン水溶液を別々に加熱し(85℃で)、最後に一緒に混合した。 β-グルカン-グリセロール混合物を溶融ゼラチンに加え,激しく攪拌して均一な製剤を得た。 最後に、DZP粉末を添加し、得られた製剤を超音波処理し、金型中に鋳造した。 偽薬のpessariesはまたDZPの常習なしで同じプロシージャと準備されました。 プラセボおよび装荷されたペッサリーは、European Pharmacopeia(7t h edition)に従って調製した。 すべてのバッチ、プラセボおよびロードされた、4℃で保存され、それらは三重に調製された。

表1にバッチ組成が報告された。

2.2. 腟のPessaries

DZPの内容の薬剤の内容は外的な標準的な方法によって分光光度法の技術を使用して定められました。 分析は、UV−可視分光光度計(Spectrophotometer UV−Vis Agilent8 4 5 3)によって行った。 検量線は偽薬のサンプルおよびDZP(6.40–87.06μ g/mL)の五つの予定された集中を考慮することによって得られました。

装荷されたペッサリー(3.6g)をバイアルに移し、4mLの絶対エタノールを加え、バイアルを37℃の超音波浴に入れ、完全に軟化させた。 ゼラチン沈殿を可能にするために、試料を6 0 0rpmで1 5分間撹拌し、次いで、1mLの懸濁液をマイクロチューブに移し、1 4で遠心分離した。Microtubesの底にゼラチンの分離を保証するため10分の24°cの000のrpm。

比色アッセイは、0.5mLの上清、1mLの3,5-ジニトロ安息香酸、および0.5mLの7M水酸化ナトリウムを添加することによって行われた。 試料の吸光度を5 3 0nmで測定した。

2.3. ロードされた製剤へのDZP分布の評価

ペッサリーへの薬物均質な分布を評価するために、各サンプルの異なる部分を収集した:ベース、ボディ、およびサミット。 特に、各部分の1.2gを絶対エタノールに添加した。 分光光度分析は、上記の実験プロトコルによって決定した。

2.4. 膣製剤のpHの評価

すべてのサンプルは、ロードされ、プラセボは、リン酸緩衝液の2mLに浸した、pH4.2で37℃で予定された時間(15、60分および4、6、24時間)の後、pH測定は、pHインキュベーション培地の変化の可能性を評価するために行われた。

2.5. In Vitro放出試験

私たちの研究室では、膣内条件をシミュレートし、製剤性能を識別するために、改良されたin vitro試験装置が適切に実現されました(図1)。 この目的のために、プラネタリウムの動きを保証するために、バイアルは適切な設計されたロータに割り当てられた。 特に、バイアルは、明確に定義された角度を有する円錐形の回転子に固定された。 実験を℃の水浴中にセットアップした。

フィギュア1

体外放出装置: 腟の環境の機械圧力を模倣するため回転動きの器械。

負荷されたペッサリー(3.6g)を、リン酸緩衝液pH4.2(2mL)の存在下でガラスバイアルに注ぎ、37rpmで速度に曝した。 予定された時間に(2, 5, 7, 15, 25, ジアゼパムの完全な分散を保証するために、液相を回収し、数分間攪拌した。 薬物放出分析は上記の吸光光度法により行った。 特に、1mLの絶対エタノールを0.5mLの液体試料に加えた。 撹拌および遠心分離の後、0.5mLの上清を抜き取り、比色アッセイを行った。 回収されたアリコートを、5 3 0nmで分光光度法で分析した(分光光度計UV−Vis Agilent8 4 5 3)。 すべての実験を三重に行い,平均値を示した。

2.6. 光安定性試験

ジアゼパムは、欧州薬局方第7版によると、光感受性である。 このため、Suntest XLS+II(Atlas)によって人工太陽光にpessariesが提出されました。

アッセイは、包装と製剤との間の可能な相互作用を評価するために実施された。 サンプルは型(第一次包装)またはガラス(製造の包装)で維持されました。

研究の最後に、Suntestのサンプルを室温で保存された標準と比較しました。

この装置は、ヨーロッパの標準的な手順に従って、正確に以下のパラメータに設定されました:時間:太陽光192時間に対応する4時間、照射制御:300-800nm、照射W/m2:750、室温: 35°C、黒標準温度(BST):45°C。

3. 結果と考察

ジアゼパムは、抗けいれん薬、抗不安薬、鎮静筋弛緩薬、記憶喪失薬などのいくつかの特性を有する長期活性型ベンゾジアゼピンであるが、不眠、熱性痙攣、てんかん重積状態、アルコール離脱症状の治療にも投与される。 それは異なったルートによって管理することができます:口頭で、IV注入、直腸の解決、直腸のゲルおよび坐剤。 しかし、経口およびIV経路は、それらが投与の簡単かつ迅速な方法を構成するが、第一は不安定で遅い吸収を示し、第二は、代わりに、医療従事者の存在に これらの仮定と、坐剤や膣ペッサリーなどの局所製剤が中枢神経系への迅速な吸収と迅速な侵入を有する可能性があるという認識に基づいて、泌尿器科医の専門家チームは、間質性膀胱炎の治療における実用的で効果的で副作用のない投与形態として、ジアゼパムを装填した膣ペッサリーを提案している。 しかし、地元の生命倫理委員会は、臨床I期において、ヘマチック薬の滴定を提供し、その臨床的および副作用を評価および監視するために、低用量で始

薬局方によると、β-グルカンの有無にかかわらず、ペッサリーの二つの異なる製剤が考慮され、設定されました。 ベータグルカンは重要な治療上のプロフィールの多糖類です。 酸化防止剤、炎症抑制の、および傷の治療の特性はこの多糖類に帰因され、これは腟のpessariesの公式の使用について科学的で理性的表します。

間質性膀胱炎は、実際には、β-グルカンが治癒できる可能性のあるreddeningsおよび潰瘍形成を伴う膀胱壁の変化を特徴とする。 但し公式により多くのconsistenceを与えるために、ベータグルカンはまた貢献します。

多数の実験変数は標準化され、再生可能な腟の公式を得ることを可能にします: ゼラチンの水和温度および時間、超音波処理時間、製造温度、ジアゼパム添加、およびペッサリー貯蔵。 調製された製剤のセットアップは、表2に報告されたプロセス条件に従って実施された。

セットアップフェーズ パラメータ評価
約75°Cの温度はすべての賦形剤の完全な融合および総計の不在を保証する
製造 超音波処理は、気泡の形成を回避します(図2(a))溶融マトリックスへのジアゼパム粉末の均質な分散を得るために貢献します
型の詰物は分析的なバランスによって均一に行われました 質量約3.6グラム
貯蔵 Pessariesは太陽ライトに露出されてはならないし、ジアゼパムの活動を維持するために4°Cで貯えられなければなりません
表2
製造および貯蔵段階における製剤プロセスのパラメータ。

ここで提案された膣システムは、再現するのは簡単ですが、ますます複雑な行列から特徴付けられました: 少量のジアゼパムは、ゼラチン、水、グリセリン、または/およびβ-グルカンの混合物中に懸濁される。 その結果、処方者は二つの重要な側面に対処しなければならない:薬物は、ベースマトリックスへの適度な溶解性のために、マトリックスに均質に分布していない。 第二の態様は、製剤中に存在する活性物質の正確な量を決定することが困難であることである。

図2では、β-グルカンの添加有無にかかわらず得られたペッサリーが報告されています。 画像は、異なる製剤がバッチに特徴的な透明で黄色を与えるゼラチンの存在のために明らかに類似しているように見える方法を示しています。 しかし、第二のバッチでは、いくつかの気泡を観察することが可能である。

最後に、すべてのバッチについて、温度貯蔵に相関する水分損失が登録されていることを強調することが重要です。 マトリックスと環境との間の水蒸気交換を仮定した。

3.1. 膣ペッサリー中の薬物含有量

ペッサリーにロードされたジアゼパムを評価するために、分光光度法を設定した。 錠剤およびアンプル中の活性定量のために提案された方法は、膣製剤に適切に適合した。 この比色法によれば、ジアゼパムはアルカリ媒体中で3,5-ジニトロ安息香酸と反応すると強く赤色の生成物を生成する。 赤色錯体はマイセンハイマー錯体と呼ばれ、反応はヤノフスキー反応と呼ばれる。

三つの異なる検量線を取り付けました。 図3(a)および3(b)では、標準的なジアゼパム溶液および標準溶液より多くのプラセボバッチ(AバッチまたはBバッチ)が比較されている。 曲線を比較することにより、ゼラチン、β-グルカン、およびグリセリンからなるマトリックスがジアゼパム決定を妨害することができることを観察す 実際、両方の図では、曲線プロファイルは平行ではありませんが、交差する傾向があります。 さらに、pessariesへの標準的な付加が付いているカーブは、上の相関係数を、それぞれ、0.9954および0.9937示す。

検量線を適用してジアゼパム負荷を決定する: 表3は、ゼラチンおよびベータグルカンのバッチの薬物割合を報告し、それぞれ、薬物の過少評価および過小評価を示している。 最初のケースでは、水および賦形剤の損失は、製造および貯蔵段階を参照して、ジアゼパムのより高い割合を説明する。 一方,β-グルカン試料中の低値は,多糖類構造が薬物に結合するという仮説によって説明できた。

(%)
トップ 中央
ゼラチンバッチ 32% 31% 37%
ベータグルカンバッチ 33% 33% 34%
表3
負荷効率(%)および ゼラチンおよびβ-グルカンバッチ中のジアゼパムの分布評価。

ジアゼパムは水不溶性の薬物であり、膣製剤へのその取り込みは調製プロセスに依存する。 最適なジアゼパム負荷を達成するために,賦形剤やプロセスパラメータなどのいくつかの要因を考慮した。 特に、β-グルカンの2%が溶融塊の粘度を増加させ、その結果、ジアゼパム粉末の均質な分布を保証することが観察された。 表3に報告されているように、実際には、ゼラチンpessariesは、薬物沈殿傾向のために、その底に高いジアゼパムの割合を示しています。 この効果は、この製剤タイプの低粘度に関連している可能性がある。

薬物添加後、超音波処理は、薬物凝集体の形成を回避し、良好な薬物分布を保証するのに寄与する主要なプロセスパラメータの1つである。

3.2. 膣製剤のpH評価

多くの研究者や臨床医によると、ICにおける痛みの神経調節と伝達は、低pH環境での直接刺激によって強調されています。 確かに、過去20年以上にわたって、膀胱炎様症状を管理するためのアルカリ化剤が良好な結果を伴って使用されてきた。 しかし、最近、いくつかの研究は、尿中のpHと膀胱炎の症状との関係を再評価し、pH5.0〜8.0の範囲ではそれらの間に関係がないと結論づけた。 したがって、以前の科学的議論に照らして、前臨床段階では、それらの分解中の局所製剤のpH変化を決定することが非常に重要である。

図4では、pessariesインキュベーション培地のpH値が報告されています。 図から、全ての製剤のpHは、1 5分後に、約5までの値を維持することが明らかである。 これらの弱酸値は、アルカリ加水分解から得られたゼラチンに起因する。 確かに、同じ数字は24時間まで一定のプロファイルを示しています。

フィギュア4

予定された時間におけるpessaryバッチのpH評価は、リン酸緩衝液4.2でインキュベートした。

3.3. ペッサリーからのジアゼパムのIn Vitro放出研究

in vitro放出研究は、膣環境の生理学的pHをシミュレートするために、溶解の予備培地としてリン酸緩衝液pH4.2

膣ペッサリーからのジアゼパムの放出プロファイルを図5に示す。 図から観察することが可能であるように、β-グルカンおよびゼラチンバッチは、それぞれ15および25分で薬物を完全に放出する。 特に、ゼラチンpessariesはβグルカンのサンプルの約40%に対して2分後に約8%のジアゼパムをちょうど解放します。 図5はまた、おそらく多糖類ネットワークへの薬物包含のメカニズムのために、β-グルカンは、前の議論によれば、マトリックスから薬物の徐々の放出を可 さらに、プラトー達成後、ゼラチンバッチは高いプロファイル(-100%)を維持し、β-グルカンのものは、おそらく仮定された薬物-多糖類相互作用のために、値が減少(80%)を示す。

フィギュア5

緩衝隣酸塩pH4.2のジアゼパムの累積解放のプロフィール。

薬物放出プロファイルは、以前の分解試験(データは報告されていない)と一致する。 実際には、β-グルカンは30分で完全に分解され、ゼラチンよりも10分多く分解される。

3.4. ベンゾジアゼピンに関連する光感受性の研究

が最近報告されている。 ICHの調和させた三者の指針10および最近のFDAの草案の指導は軽いテストが耐久度テストの重要部分であるべきであることを示す。 したがって、ジアゼパム光化学ストレス条件の安定性を試験することが重要である。 ガヤルド他 光の博覧会の後、劣化生成物が形成され、ことが観察されました。 これらの考察に基づいてすべての腟の公式は紫外線目に見える照射にpessaryにそしてそう、薬剤の型のスクリーニングの効果を確認するために堤出され

表4では、バッチタイプとは独立して、加速条件に提出され、金型に保存されたすべてのサンプルを観察することができるように、ジアゼパムへの照射の分解力による薬物量の減少を示すだけでなく、ジアゼパム-パッケージング相互作用の可能性による薬物量の減少を示す。 薬局方では、ポリ塩化ビニルが輸液包装の成分である場合、ジアゼパムと相互作用し、結果的にそれを吸着する可能性があることが報告されている。

標準条件 加速条件
ガラス中の製剤(標準試料)
Β-グルカンサンプル 高分子型製剤
ガラスの公式(標準 サンプル)
表4
紫外線暴露後のジアゼパムの光分解:金型に保管されたバッチおよび製造容器(ホウケイ酸ガラス)に保管されたバッチにおける薬物の量の割合。

最後に、ベータグルカンのサンプルが試金の終わりに構造を維持し、形作ることを下線を引くことは興味深いです代りに、ゼラチンのpessariesはベータグルカン これは、多糖類が、上記で観察された製剤からの薬物の一貫性および遅い放出を保証することを確認する。

4. 結論

本研究では、間質性膀胱炎治療における膀胱痛治癒のための興味深い水不溶性薬物が、投与が簡単で、中枢系に副作用がない局所製剤にロードされ

公式の薬局方に報告されている古典的な式の代わりに、この研究は、顕著な治療的および技術的特性を有する多糖類を添加した膣ペッサリーを示唆 多糖類添加の選択は,薬物がマトリックス中に均一に分布している場合,良好な感覚刺激特性を有するペッサリーのハンドリングの達成に成功すると考えられる。

さらに、私達の実験室で設計されている薬剤解放テスト器具は腟の環境の機械圧力を模倣することを割り当てる。 特に、この装置は公式試験に関して異なる利点を提示する。 まず第一に、必要とされる溶解媒体の体積およびシステム形状は、in vivo条件を保証する。 さらに、これらの条件では、極端に低い薬物量であっても、容易に定量することができる。

溶解媒体量は小さいが文献と一致しているにもかかわらず、ペッサリーは30分以内に薬物を溶解して完全に放出し、おそらく官能特性および薬理学的有効性の点で迅速な薬理学的有効性を保証する。

この研究で得られた有望な結果は、間質性膀胱炎患者に対する治療効果を評価することが可能な臨床試験を開発する機会を表しています。

利益相反

この作品は、ここで提示されたものであり、利益相反はありません。

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