Innovativ Tilnærming For Interstitiell Cystitt: Vaginale Pessarer Lastet Diazepam-En Foreløpig Studie

Abstract

Blære smerte er en karakteristisk lidelse av interstitiell cystitt. Diazepam er kjent for sin antispasmodiske aktivitet i behandlingen av muskulær hypertonus. Målet med dette arbeidet var å utvikle og karakterisere vaginale pessarer som et intravaginal leveringssystem av diazepam for behandling av interstitial cystitis. Spesielt ble ytelsen av to typer formuleringer, med og uten beta-glukan, sammenlignet. Spesielt ble preparering av pessarer, i henhold til den modifiserte Farmakopeia-protokollen, oppsett av analysemetoden for å bestemme diazepam, ph-evaluering, oppløsningsprofil og fotostabilitetstest rapportert. Resultatene viste at den modifiserte protokollen tillot å oppnå optimale vaginale pessarer, uten luftbobler, med god konsistens og håndtering og med gode pH-profiler. For å bestemme diazepam-mengden ble kalibreringskurver med gode korrelasjonskoeffisienter oppnådd ved spektrofotometrisk metode ved bruk av placebo-pessarer som matrise med tilsetning av diazepam-standardoppløsning. Denne metoden ble demonstrert fornuftig og nøyaktig for å bestemme mengden av stoffet i grupper. Oppløsningsprofiler viste en komplett diazepamfrigivelse like etter 15 minutter, selv om beta-glukanpessarier frigjorde stoffet mer gradvis. Endelig ble en mulig stofffotodegradering etter forverret UV-synlig eksponering evaluert.

1. Innledning

Interstitial cystitis (ic), også kjent som smertefullt blæresyndrom, er en plagsom, kronisk blæresykdom av ukjent årsak, med symptomer på smerte, trykk eller ubehag relatert til blæren og vanligvis ledsaget av et hyppig og presserende behov for å urinere dag og natt . Smerte eller ubehag er det viktigste og svekkende symptomet på denne lidelsen. Det kan oppleves som ubehag eller ømhet eller irritasjon eller brennende følelse i blæren, i form av spasmer i eller rundt blæren, eller stikkende eller brennende vaginal smerte eller bare en følelse av trykk på eller i blæren eller en følelse av fylde selv når det bare er litt urin i blæren. IC smerte kan stamme ikke bare fra blæren, men også fra nærliggende muskler, nerver og til og med referert smerte fra andre deler av kroppen . Med tiden lærer de fleste pasienter den subtile forskjellen i symptomer mellom EN IC-flare forårsaket av direkte blæreirritasjon (dvs., diett) versus muskelspasmer (dvs. sex, kjøring i bil, etc.). Blæreveggirritasjon har en tendens til å skape mer av en skarp, intens smerte. Pelvic floor muskelspasmer skape en dypere, tyngre brennende følelse som kan gjøre sitter mer ubehagelig. Nervesmerter kan være mer elektriske, varme eller searing i naturen. Hver potensiell kilde til smerte har sine egne symptomer og behandlinger.

Til tross for all forskning og studier som er utført, er det ennå ikke funnet noen mulighet for å kurere denne sykdommen, og det er heller ikke et enkelt stoff som er effektivt hos alle pasienter. Likevel er det mange forskjellige alternativer å prøve. BEHANDLING AV IC bør fokusere på smerte og urologiske symptomer som haster og frekvens. Imidlertid bør smertebehandling spille en viktig rolle . Hvis smerten er svært alvorlig og ikke reagerer på standardbehandling, kan en smerteklinikk henvisning være tilrådelig.

faktisk, for smertebehandling mange narkotika klasser har blitt administrert. Benzodiazepiner (bzd) anses å være behandling av valg for akutt behandling av alvorlig smerte. BZDs har en rask innsettende virkning når de er levert inn i sentralnervesystemet og er trygge . Spesielt Diazepam er et langtidsvirkende benzodiazepin med antikonvulsive, anxiolytiske, beroligende muskelavslappende og amnesiske egenskaper. Det har imidlertid kort virkningstid og bør gis intravenøst eller rektalt. Spesielt er absorpsjonen etter oral administrering av tabletter vanligvis langsommere enn etter parenteral eller rektal administrering . I stedet bør doseringsformer designet for rektal administrasjon ikke forårsake irritasjon, bør vise god oppbevaring i den nedre delen av tyktarmen, og bør være egnet nok til å bli akseptert av pasienten.

I Henhold Til disse betraktninger, balkis studert frigjøring av diazepam fra forskjellige konvensjonelle og hul type stikkpille baser, og han konkluderte med at de beste resultatene ble oppnådd ved bruk av glyserol-gelatin OG glyserol-PEG1540 som vannløselige baser .

For tiden foreskriver noen leger vaginale diazepam (Valium) suppositorier eller tabletter for å lindre smerten av bekkenbunnsdysfunksjon, interstitial cystitis, vulvar smerte og seksuell smerte. Dette fører til mindre døsighet som en bivirkning enn oral valium, men likevel kan det fortsatt gi mild sedasjon . Dosering er vanligvis 5-10 mg valium sammensatt (i en parafinbase), som starter en gang om natten og titrerer. En alternativ til rektal administrering av diazepam kan betraktes som intravaginal, for å vurdere tilleggsbehandling av blæresmerter ved interstitiell cystitt. Med tanke på alle de ovennevnte fakta har diazepambelastede vaginale pessarer blitt formulert og karakterisert for å foreslå en nyskapende terapeutisk tilnærming til smertefulle symptomer, egenskaper ved interstitial cystitis .

spesielt er diazepambelastede vaginale pessarer, beskrevet i denne studien, formulert med beta-glukan-tillegg som aktivt hjelpestoff. Ifølge litteraturen, beta-glukan hindrer og behandler mukositt gjennom sårheling og vev omorganisering, og dette aspektet er svært interessant siden pasienter berørt med interstitiell cystitt viser en skadet slimete vev med sår.

2. Materialer Og Reagenser

Diazepampulver (DZP)ble levert AV FIS-SPA( Italia); β-glukan (CM-glukangranulat, SD = 0,85) og gelatin (maskestørrelse 20, batch 4767) pellets ble kjøpt henholdsvis fra Mibelle Biochemistry og Lapi-Gelatin s.p. a. Diazepam ble oppnådd med offisiell autorisasjon. Alle andre materialer var av analytisk karakter.

2.1. Fremstilling Av Dzp Vaginale Pessaries

Vaginale lastet pessaries ble fremstilt ved å hydrere gelatin i vann over natten. Gelatin ble oppvarmet i et ultralyd termisk bad, ved 85°C, til fullstendig fusjon. Samtidig har glyserol og β-glukan vandig oppløsning blitt oppvarmet separat (ved 85°C) og til slutt blandet sammen. β-glukan-glyserolblanding ble tilsatt til smeltet gelatin og omrørt kraftig for å oppnå en homogen formulering. TIL slutt ble DZP pulver tilsatt, og den oppnådde formulering ble sonikert og støpt i formene. Placebo pessaries har også blitt utarbeidet med samme prosedyre uten DZP avhengighet. Placebo og lastet pessaries ble utarbeidet I Henhold Til European Pharmacopeia (7. utgave). Alle batcher, placebo og lastet, ble lagret på 4°C, og de ble tilberedt i tre eksemplarer.

i Tabell 1 grupper sammensetning ble rapportert.

2.2. Legemiddelinnhold i Vaginale Pessarer

dzp-innhold ble bestemt ved hjelp av spektrofotometrisk teknikk ved ekstern standardmetode. Analysen ble utført MED UV-synlig spektrofotometer (Spektrofotometer UV-Vis Agilent 8453). Kalibreringskurven ble oppnådd ved å vurdere placeboprøver og fem forskjellige planlagte konsentrasjoner AV DZP (6,40–87,06 µ/mL).

Lastet pessar (3,6 g) ble overført til hetteglass og 4 mL absolutt etanol ble tilsatt, og hetteglasset ble plassert i ultralydbadet ved 37°C til fullstendig mykning. Prøvene ble omrørt ved 600 rpm i 15 minutter for å tillate gelatinutfelling, og deretter har 1 mL av suspensjonen, overført til en mikrorør, blitt sentrifugert ved 14.000 rpm, ved 24°C i 10 minutter for å sikre gelatinseparasjon til mikrotubebunnen.

Kolorimetrisk analyse ble utført ved å tilsette 0,5 mL supernatant, 1 mL 3,5-dinitrobenzosyre og 0,5 mL 7 m natriumhydroksid . Absorbansen av prøven ble målt ved 530 nm.

2.3. Evaluering Av DZP-Distribusjon I Belastede Formuleringer

for å evaluere legemiddelhomogen distribusjon i pessarer ble forskjellige deler av hver prøve samlet: base, kropp og topp. Spesielt ble 1,2 g av hver del tilsatt til absolutt etanol. Spektrofotometrisk analyse ble bestemt av eksperimentell protokoll beskrevet ovenfor.

2.4. Evaluering Av Ph For Vaginale Formuleringer

Alle prøver, lastet og placebo, ble gjennomvåt i 2 mL fosfatbufferoppløsning, pH 4,2 ved 37°C. etter planlagte tider (15, 60 minutter og 4, 6, 24 timer) ble pH-målinger utført For å evaluere mulig endring av ph-inkubasjonsmedium.

2.5. In Vitro Release Study

i vårt laboratorium ble et modifisert in vitro testapparat realisert (Figur 1) for å simulere intravaginale forhold og diskriminere formuleringsytelse. Til dette formål ble hetteglass allokert til egnet utformet rotor for å garantere planetariumbevegelse. Spesielt ble hetteglassene festet til konisk rotor med en veldefinert vinkel. Forsøket ble satt opp i et vannbad ved °C.

Figur 1

in vitro frigjøringsapparat: instrument ved rotasjonsbevegelse for å simulere mekanisk stress i et vaginalt miljø.

Lastet pessaries (3,6 g) ble helt i et hetteglass i nærvær av fosfatbuffer pH 4,2 (2 mL) utsatt for hastighet ved 37 rpm. På fastsatte tider (2, 5, 7, 15, 25, og 35 minutter) ble væskefasen trukket opp og omrørt i noen minutter for å garantere fullstendig dispersjon av diazepam. Legemiddelfrigivelsesanalyser ble utført ved den spektrofotometriske metoden rapportert ovenfor. Spesielt ble 1 mL absolutt etanol tilsatt til 0,5 mL væskeprøve. Etter omrøring og sentrifugering ble 0,5 mL av supernatanten trukket tilbake for å utføre kolorimetrisk analyse. Tilbaketrukne alikvoter ble analysert spektrofotometrisk ved 530 nm (Spektrofotometer UV-Vis Agilent 8453). Alle forsøkene ble utført i tre eksemplarer, og gjennomsnittsverdier ble presentert.

2.6. Fotostabilitetsstudie

Diazepam, ifølge European Pharmacopoeia 7th Edition, er fotosensibel. Av Denne grunn ble pessarene sendt til kunstig sollys Av Suntest XLS + II (Atlas).

analysen ble utført for å evaluere mulig interaksjon mellom emballasje og formulering. Prøver ble opprettholdt i form (primæremballasje) eller i glass (produksjonsemballasje).

ved slutten av studien ble prøver i Suntest sammenlignet med standarder lagret ved romtemperatur.

instrumentet ble satt opp i henhold til Standard Europeisk prosedyre og nøyaktig til følgende parametere: tid: 4 timer tilsvarende 192 timer sollys, bestrålingskontroll: 300-800 nm, bestråling W / m2: 750, romtemperatur: 35°C, svart standard temperatur( BST): 45°C.

3. Resultater Og Diskusjon

Diazepam Er et langvarig benzodiazepin med flere egenskaper, som antikonvulsiv, anxiolytisk, beroligende muskelavslappende og amnesisk, Men det administreres også ved behandling av søvnløshet, feberkramper, status epilepticus og alkoholabstinenssymptomer. Det kan administreres via forskjellige veier: oralt, IV injeksjoner, rektale løsninger, rektale geler og suppositorier. Men oral og IV rute, selv om de utgjør en enkel og rask måte å administrere, den første viser uberegnelig og langsommere absorpsjon, den andre, i stedet, er bundet av tilstedeværelsen av medisinsk personell. På grunnlag av disse antagelsene og bevisstheten om at en aktuell formulering, som suppositorier og vaginale pessarer, kunne ha en rask absorpsjon og rask inngang til sentralnervesystemet, har et ekspertteam av urologer foreslått vaginale pessarer lastet diazepam, som praktisk, effektiv og manglende bivirkninger administrasjonsform ved behandling av interstitial cystitis. Imidlertid har en lavere dose medikament blitt vurdert fordi lokal bioetisk komite fremhevet kravet, i en klinisk i-fase, til å begynne med en lav dose for å sørge for haematisk legemiddeltitrering, evaluering og overvåking av kliniske og bivirkninger.

Ifølge Pharmacopoeia ble to forskjellige formuleringer av pessarer med og uten beta-glukan vurdert og satt opp. Beta-glukan er et polysakkarid med betydelig terapeutisk profil. Antioxidant, antiinflammatorisk og sårheling egenskaper har blitt tilskrevet dette polysakkaridet, og dette representerer vitenskapelig rasjonell om bruken i vaginal pessaries formulering.

Interstitiell cystitt er faktisk preget av endringer i blæreveggen med rødhet og sår som beta-glukan kan være i stand til å helbrede. Imidlertid bidrar beta-glukan også til å gi mer konsistens til formulering.

Tallrike eksperimentelle parametere tillater å oppnå standardiserte og reproduserbare vaginale formuleringer: hydratiseringstemperatur og tid for gelatin, sonikeringstid, produksjonstemperatur, diazepamtilsetning og pessarlagring. Oppsettet av preparerte formuleringer er utført i henhold til prosessbetingelsene rapportert I Tabell 2.

Oppsettfase Parametervurdering
Temperatur på ca 75°c garanterer en fullstendig sammensmelting av alle hjelpestoffer og fravær av aggregater
Produksjon Sonikering unngår dannelse av luftbobler (Figur 2 (a)) som bidrar til å oppnå en homogen dispersjon av diazepampulver i smeltet matriks
Mold fylling har blitt utført av analytisk balanse for å jevne masseinnhold på ca 3,6 gram
Lagring Pessarer må ikke utsettes for sollys, og De må oppbevares ved 4°C for å bevare diazepamaktiviteten
Tabell 2
Parametere for formuleringsprosess i produksjons-og lagringsfase.

Vaginale systemer, her foreslått, men enkle å reprodusere, ble preget av en matrise mer og mer kompleks: en liten mengde diazepam suspenderes i en blanding av gelatin, vann, glyserin eller/og beta-glukan. Følgelig må formulatoren håndtere to kritiske aspekter: stoffet er ikke homogent fordelt i matrisen, på grunn av sin moderate oppløselighet i basematrisen. Det andre aspektet er at det er vanskelig å bestemme den eksakte mengden aktiv tilstede i formulering.

i Figur 2 ble pessarer, oppnådd med og uten tilsetning av beta-glukan, rapportert. Bilder viser hvordan forskjellige formuleringer kan virke tilsynelatende like på grunn av gelatinetilstedeværelse som gir en karakteristisk gjennomsiktig og gul farge til batchene. Imidlertid er det mulig å observere, i den andre batchen, flere luftbobler.

Til slutt er Det Viktig å understreke at for alle partier er det registrert et vanntap, korrelert med temperaturlagring. En vanndamputveksling mellom matrise og miljø ble hypotese.

3.1. Legemiddelinnhold I Vaginale Pessarer

for å evaluere diazepam lastet inn i pessarene ble det opprettet en spektrofotometrisk metode. Metoden foreslått for aktiv bestemmelse i tabletter og ampuller var passende tilpasset vaginale formuleringer. Ifølge denne kolorimetriske metoden gir diazepam intenst rødt farget produkt når det reagerer med 3,5-dinitrobenzoesyre i alkalisk medium. Det røde komplekset kalles Meisenheimer-komplekset, og reaksjonen kalles Janovsky-reaksjonen .

Tre forskjellige kalibreringskurver ble montert. I Figur 3(a) og 3 (b) standard diazepamløsninger og standardoppløsning er flere placebogrupper (a-batcher eller B-batcher) sammenlignet. Ved å sammenligne kurver er det mulig å observere at matrisen, laget av gelatin, beta-glukan og glyserin, er i stand til å forstyrre diazepambestemmelse. Faktisk i begge tallene er kurveprofiler ikke parallelle, men de har en tendens til å krysse. Videre viser kurver, med standard tillegg til pessarene, korrelasjonskoeffisienter over henholdsvis 0,9954 og 0,9937.

Kalibreringskurver brukes for å bestemme diazepam-lasting: Tabell 3 rapporterer legemiddelprosent av gelatin-og betaglukanpartier, som viser henholdsvis over-og undervurdering av legemiddel. I det første tilfellet forklarer vann-og hjelpestofftap, med henvisning til produksjons-og lagringsfase, en høyere prosentandel av diazepam. På den annen side kan den nedre i beta-glukanprøver forklares ved hypoteser at polysakkaridstruktur binder stoffet.

Lastet diazepam prosent innhold ensartethet (%)
Topp Sentral Bunn
Gelatin batch 32% 31% 37%
Beta-glukan batch 33% 33% 34%
Tabell 3
Belastningseffektivitet ( % ) og fordeling evaluering av diazepam i gelatin og beta-glukan grupper.

Diazepam Er et vannløselig stoff, og dets inkorporering i vaginal formulering er avhengig av prepareringsprosessen. For å oppnå optimal diazepambelastning ble flere faktorer, som hjelpestoffer og prosessparametere, vurdert. Spesielt ble det observert at 2% av beta-glukan øker viskositeten til smeltet masse, og garanterer dermed en homogen fordeling av diazepampulver. Som det er rapportert I Tabell 3, viser faktisk gelatinepessarier en høyere diazepamprosent på bunnen på grunn av stoffutfallstendens. Denne effekten kan være relatert til lav viskositet av denne formuleringstypen.

etter legemiddeltilsetning er sonikering en av de viktigste prosessparametrene som bidrar til å unngå dannelse av legemiddelaggregater og for å sikre en god legemiddelfordeling.

3.2. pH-Evaluering Av Vaginale Formuleringer

ifølge mange forskere og klinikere fremheves nevralmodulasjon og overføring av smerte I IC ved direkte stimulering i lave pH-miljøer. Faktisk, i løpet av de siste 20 årene eller mer, har alkaliniserende midler i å håndtere cystitis-lignende symptomer blitt brukt med gode resultater. Men nylig revurderte flere studier forholdet mellom urin pH og cystitis symptomer, og konkluderte med at det ikke var noen sammenheng mellom dem for a som varierer mellom pH 5.0–8.0. I lys av de tidligere vitenskapelige diskusjonene er det derfor ekstremt viktig i preklinisk fase å bestemme ph-endringer av aktuell formulering under disaggregering.

I Figur 4 ph-verdier av pessaries inkubasjonsmedium er rapportert. Fra tallene er det tydelig at pH av alle formuleringer opprettholder, like etter 15 minutter, verdier til ~5. Disse svake syreverdiene tilskrives gelatin, oppnådd ved alkalisk hydrolyse. Faktisk viser de samme tallene en konstant profil til 24 timer.

Figur 4

pH-evaluering av pessarpartier ved planlagte tider, inkubert i fosfatbuffer 4.2.

3.3. In Vitro-Frisettingsstudie Av Diazepam Fra Pessarer

in vitro-frisettingsstudie ble utført ved bruk av fosfatbuffer pH 4,2 som foreløpig oppløsningsmedium for å simulere fysiologisk pH i vaginalt miljø.

Release profiler av diazepam fra vaginale pessarer er vist I Figur 5. Som det er mulig å observere fra figurene, frigjør beta-glukan og gelatinepartier helt stoffet på henholdsvis 15 og 25 minutter. Spesielt frigjør gelatinepessarier ca 40% diazepam like etter 2 minutter mot ca 8% av beta-glukanprøver. Figur 5 viser også at, sannsynligvis på grunn av mekanismen for legemiddelinkludering i polysakkaridnettverk, tillater beta-glukan en gradvis frigjøring av stoffet fra matrisen i henhold til forrige diskusjon. Videre, etter platå prestasjon, gelatin partier opprettholde høy profil (~100%), mens beta-glukan de viser verdier nedgang (80%), sannsynligvis på grunn av en antatt narkotika-polysakkarid interaksjon.

Figur 5

diazepam kumulative frigjøringsprofiler i bufferfosfat pH 4.2.

Legemiddelfrigivelsesprofiler er avtalt med tidligere disaggregasjonstest(data ikke rapportert). Faktisk, beta-glukan pessaries disaggregere helt på 30 minutter, 10 minutter mer enn gelatin seg.

3.4. Fotostabilitetsstudie

Fotosensitivitet, assosiert med benzodiazepiner, er nylig rapportert . ICH Harmonisert Trepartsretningslinje 10 og nylig FDA utkast veiledning sier at lys testing bør være en integrert del av stresstest. Derfor er det av interesse å teste stabiliteten av diazepam fotokjemiske stressforhold. Gallardo et al. observert at etter lysutstilling dannet nedbrytningsprodukter. På grunnlag av disse hensynene har alle vaginale formuleringer blitt sendt TIL UV-synlig bestråling for å verifisere screeningseffekten av mugg på pessary og så på stoffet.

Som det er mulig å observere i Tabell 4, uavhengig av batchtype, alle prøver sendt til akselererte forhold og lagret i mugg, viser de en reduksjon av legemiddelmengde på grunn av nedbrytningskraft av bestrålinger på diazepam, men også på grunn av en mulig diazepam-emballasjeinteraksjon. I Farmakopeia er det rapportert at polyvinylklorid, når det er en bestanddel i infusjonspakningen, kan interagere med diazepam og dermed adsorbere det.

Standard tilstand Akselererte forhold
Gelatinprøve Formulering
i polymerform
Formulering i glass (standard prøve)
Beta-glukanprøve Formulering i polymerform
Formulering i glass (standard eksempel)
Tabell 4
Fotodegradering av diazepam etter UV-stråleutstilling: prosentvis mengde legemiddel i grupper lagret i mugg og i grupper lagret i produksjonsbeholder(borosilikatglass).

Til slutt er det interessant å understreke at beta-glukanprøver har opprettholdt sin struktur og form ved slutten av analysen, i stedet virker gelatinepessarene helt smeltet, sannsynligvis på grunn av mangel på teksturmiddel, som beta-glukan. Dette bekrefter at polysakkarid garanterer en konsistens og en langsom frigjøring av legemiddel fra formulering, bare observert ovenfor.

4. Konklusjoner

i denne studien er et interessant vannløselig stoff for blæresmerte kur i interstitial cystitis terapi blitt lastet i en lokal formulering, enkel å administrere og uten bivirkninger på sentralt system.

i alternativ til klassisk formel rapportert til offisiell Pharmacopeia, foreslår dette arbeidet vaginale pessarer med tilsetning av polysakkarid med bemerkelsesverdige terapeutiske og teknologiske egenskaper. Valget av polysakkaridtilsetning synes å bidra med hell til å oppnå håndtering av pessarer med gode organoleptiske egenskaper, når stoffet er homogent fordelt i en matrise.

dessuten tillater legemiddelutløsningstestapparat, designet i våre laboratorier, å simulere mekanisk stress i et vaginalt miljø. Spesielt presenterer dette apparatet forskjellige fordeler med hensyn til offisiell test. Først av alt volumet av oppløsningsmedium som kreves og systemgeometrien sikrer in vivo forhold. Videre, under disse forholdene, kan selv ekstremt lav medikamentmengde enkelt kvantifiseres.

til tross for at oppløsningsmediumsvolumet er lite, men sammenhengende med litteraturen, ble pessarene oppløst og frigjort fullstendig stoffet innen 30 minutter, noe som garanterer sannsynligvis en rask farmakologisk effektprøver endring i form av organoleptiske egenskaper og farmakologisk effekt.

de lovende resultatene i denne studien representerer muligheten til å utvikle en klinisk studie, når det er mulig å evaluere sin terapeutiske effekt på interstitial cystitis pasienter.

Interessekonflikt

dette arbeidet, her presentert, har ingen interessekonflikt.

Legg igjen en kommentar

Din e-postadresse vil ikke bli publisert.