abordagem inovadora para Cistite intersticial: pessários vaginais carregados Diazepam – um estudo preliminar

resumo

a dor na bexiga é um distúrbio característico da cistite intersticial. O Diazepam é bem conhecido por sua atividade antiespasmódica no tratamento do hipertonia muscular. O objetivo deste trabalho foi desenvolver e caracterizar pessários vaginais como um sistema de entrega intravaginal de diazepam para o tratamento da cistite intersticial. Em particular, o desempenho de dois tipos de formulações, com e sem beta-glucano, foi comparado. Em particular, a preparação de pessários, de acordo com o protocolo de Farmacopeia modificado, a configuração do método analítico para determinar diazepam, avaliação de pH, perfil de dissolução e ensaio de fotoestabilidade foram relatados. Os resultados mostraram que o protocolo modificado permitiu obter pessários vaginais ótimos, sem bolhas de ar, com boa consistência e manuseio e com bons perfis de pH. Para determinar a quantidade de diazepam, foram obtidas curvas de calibração com bons coeficientes de correlação, pelo método espectrofotométrico, utilizando pessários placebo como matriz com adição de solução padrão diazepam. Este método foi demonstrado sensato e preciso para determinar a quantidade de medicamento em lotes. Os perfis de dissolução mostraram uma liberação completa de diazepam logo após 15 minutos, mesmo que os pessários de beta-glucano liberassem a droga mais gradualmente. Finalmente, uma possível fotodegradação medicamentosa após exposição UV-visível exacerbada foi avaliada.

1. Introdução

cistite Intersticial (CI), também conhecida como síndrome da bexiga dolorosa, é uma angustiante, crônica, distúrbio da bexiga, de causa desconhecida, com sintomas de dor, pressão ou desconforto relacionados à bexiga e, geralmente, acompanhada por uma necessidade freqüente e urgente de urinar, de dia e de noite . Dor ou desconforto é o sintoma mais importante e debilitante desse distúrbio. Ele pode ser experimentado como desconforto ou dor ou irritação ou sensação de ardor na bexiga, na forma de espasmos na ou ao redor da bexiga, ou pontadas ou ardor vaginal, dor ou, simplesmente, uma sensação de pressão na bexiga ou uma sensação de plenitude, mesmo quando existe apenas um pouco de urina na bexiga. A dor pode se originar não apenas da bexiga, mas também de músculos, nervos e até mesmo dor de outras partes do corpo . Com o tempo, a maioria dos pacientes aprende a sutil diferença nos sintomas entre um surto de CI causado por irritação direta da bexiga (ou seja,, dieta) versus um espasmo muscular (ou seja, sexo, dirigir em um carro, etc.). Irritação da parede da bexiga tem uma tendência a criar mais de uma dor aguda e intensa. Os espasmos musculares do assoalho pélvico criam uma sensação de queimação mais profunda e pesada que pode tornar a sessão mais desconfortável. A dor nervosa pode ser mais elétrica, quente ou abrasadora na natureza. Cada fonte potencial de dor tem seus próprios sintomas e tratamentos.

apesar de todas as pesquisas e estudos realizados, ainda não foi encontrada possibilidade de cura desta doença, nem existe um único medicamento eficaz em todos os pacientes. No entanto, existem muitas opções diferentes para tentar. O tratamento da CI deve se concentrar na dor e nos sintomas urológicos, como urgência e frequência. No entanto, o manejo da dor deve desempenhar um papel importante . Se a dor for muito grave e não responder ao tratamento padrão, um encaminhamento para a clínica de dor pode ser aconselhável.

na verdade, para a terapia da dor, muitas classes de medicamentos foram administradas. Os benzodiazepínicos (BZDs) são considerados o tratamento de escolha para o tratamento agudo da dor intensa. BZDs têm um rápido início de ação uma vez entregue no sistema nervoso central e são seguros . O Diazepam, em particular, é uma benzodiazepina de ação prolongada com propriedades anticonvulsivantes, ansiolíticas, relaxantes musculares sedativas e amnésicas. No entanto, tem uma curta duração de ação e deve ser administrado por via intravenosa ou retal. Em particular, a absorção após administração oral de comprimidos é geralmente mais lenta do que após administração parenteral ou retal . Em vez disso, as formas de dosagem projetadas para administração retal não devem causar irritação, devem mostrar boa retenção na região inferior do intestino grosso e devem ser adequadas o suficiente para serem aceitas pelo paciente.

de acordo com essas considerações, Balkis estudou a liberação de diazepam de diferentes bases de supositórios convencionais e ocos e concluiu que os melhores resultados foram obtidos usando glicerol-gelatina e glicerol-PEG1540 como bases solúveis em água .Atualmente, alguns médicos estão prescrevendo supositórios ou comprimidos de diazepam vaginal (Valium) para ajudar a aliviar a dor da disfunção do assoalho pélvico, cistite intersticial, dor vulvar e dor sexual. Isso causa menos sonolência como efeito colateral do que o valium oral, mas, no entanto, ainda pode produzir sedação leve . A dosagem é geralmente 5-10 mg valium composto (em uma base de parafina), começando uma vez todas as noites e titulação. Uma via alternativa para a administração retal de diazepam pode ser considerada a via intravaginal, para considerar o tratamento adjuvante da dor na bexiga na cistite intersticial. Considerando todos os fatos acima mencionados, os pessários vaginais carregados de diazepam foram formulados e caracterizados a fim de propor uma abordagem terapêutica inovadora para sintomas dolorosos, características da cistite intersticial .

em particular, os pessários vaginais carregados com diazepam, descritos neste estudo, foram formulados com adição de beta-glucano como excipiente ativo. De acordo com a literatura, o beta-glucano previne e trata a mucosite por meio da cicatrização de feridas e reorganização tecidual , e esse aspecto é muito interessante, pois os pacientes afetados pela cistite intersticial apresentam tecido mucoso danificado com ulcerações.

2. Materiais e Reagentes

Diazepam em pó (DZP) foi fornecida pela FIS-SPA (Itália); β-glucano (CM-glucano, granulados, SD = 0.85) e gelatina (tamanho de malha 20, lote 4767) pelotas foram adquiridos, respectivamente, da Mibelle Biochemistry e Lapi-Gelatina s.p.um. O Diazepam foi obtido com autorização oficial. Todos os outros materiais eram de grau analítico.

2.1. Preparação de pessários vaginais DZP

pessários vaginais carregados foram preparados por gelatina hidratante em água durante a noite. A gelatina foi aquecida em banho termal de ultrassom, a 85°C, até a fusão completa. Ao mesmo tempo, o glicerol e a solução aquosa β-glucana foram aquecidos separadamente (a 85°C) e finalmente misturados. a mistura de β-glucano-glicerol foi adicionada à gelatina fundida e agitada vigorosamente para obter uma formulação homogênea. Finalmente, o pó DZP foi adicionado e a formulação obtida foi sonicada e moldada nos moldes. Pessários Placebo também foram preparados com o mesmo procedimento sem dependência de DZP. Placebo e pessários carregados foram preparados de acordo com a Farmacopeia Europeia (7ª edição). Todos os lotes, placebo e carregados, foram armazenados a 4°C e foram preparados em triplicado.

na tabela 1, foi relatada a composição dos lotes.

2.2. O conteúdo de drogas em pessários vaginais

DZP foi determinado usando a técnica espectrofotométrica pelo método padrão externo. A análise foi realizada por espectrofotômetro Uv-visível (espectrofotômetro UV-Vis Agilent 8453). A curva de calibração foi obtida considerando–se amostras de placebo e cinco diferentes concentrações programadas de DZP (6,40-87,06 µg/mL).

pessário carregado (3,6 g) foi transferido para o frasco e 4 mL de etanol absoluto foram adicionados, e o frasco foi colocado no banho ultrassônico a 37°C até o amolecimento completo. As amostras foram agitadas a 600 rpm por 15 minutos, a fim de permitir a precipitação de gelatina, e então 1 mL da suspensão, transferida para um microtubo, foi centrifugado a 14.000 rpm, a 24 ° C por 10 minutos, a fim de garantir a separação da gelatina para o fundo dos microtubos.

o ensaio colorimétrico foi realizado pela adição de 0,5 mL de sobrenadante, 1 mL de ácido 3,5-dinitrobenzóico e 0,5 mL de hidróxido de sódio de 7 m. A absorvância da amostra foi medida a 530 nm.

2.3. Avaliação da distribuição DZP em formulações carregadas

a fim de avaliar a distribuição homogênea de drogas em pessários, diferentes partes de cada amostra foram coletadas: base, corpo e cume. Em particular, 1,2 g de cada parte foi adicionado ao etanol absoluto. A análise espectrofotométrica foi determinada pelo protocolo experimental descrito acima.

2.4. Avaliação do pH de formulações vaginais

todas as amostras, carregadas e placebo, foram embebidas em 2 mL de solução tampão de fosfato, pH 4,2 a 37°C. Após horários programados (15, 60 minutos e 4, 6, 24 horas) foram realizadas medições de pH para avaliar a possível mudança do meio de incubação do pH.

2.5. Estudo de liberação in Vitro

em nosso laboratório, um aparelho de teste in vitro modificado foi adequadamente realizado (Figura 1) a fim de simular condições intravaginais e discriminar o desempenho da formulação. Para esse fim, os frascos foram alocados para rotor projetado adequado, a fim de garantir o movimento do Planetário. Em particular, os frascos foram fixados ao rotor cônico com um ângulo bem definido. O experimento foi estabelecido em um banho de água em °C.

Figura 1

In vitro de liberação de aparelhos: instrumento no movimento rotatório a fim simular o esforço mecânico em um ambiente vaginal.

pessários carregados (3,6 g) foram despejados em um frasco de vidro na presença de tampão fosfato pH 4,2 (2 mL) exposto à velocidade a 37 rpm. Em horários programados (2, 5, 7, 15, 25, e 35 minutos) a fase líquida foi retirada e agitada por alguns minutos, a fim de garantir a dispersão completa do diazepam. As análises de liberação de drogas foram realizadas pelo método espectrofotométrico relatado acima. Em particular, 1 mL de etanol absoluto foi adicionado a 0,5 mL de amostra líquida. Após agitação e centrifugação, 0,5 mL do sobrenadante foram retirados para realizar ensaio colorimétrico. As alíquotas retiradas foram analisadas espectrofotometricamente a 530 nm (espectrofotômetro Uv-Vis Agilent 8453). Todos os experimentos foram realizados em triplicado e valores médios foram apresentados.

2.6. O estudo de fotoestabilidade

Diazepam, de acordo com a Farmacopeia Europeia 7ª edição, é fotossensível. Por esse motivo, os pessários foram submetidos à luz solar artificial pelo Suntest XLS +II (Atlas).

o ensaio foi realizado para avaliar a possível interação entre Embalagem e formulação. As amostras foram mantidas em molde (embalagem primária) ou em vidro (embalagem de fabricação).

no final do estudo, as amostras em Suntest foram comparadas com os padrões armazenados em temperatura ambiente.

o instrumento foi configurado de acordo com o procedimento europeu padrão e precisamente para os seguintes parâmetros: tempo: 4 horas correspondentes a 192 horas de luz solar, controle de irradiação: 300-800 nm, irradiação W / m2: 750, temperatura ambiente: 35 ° C, Preto Temperatura Padrão( BST): 45°C.

3. Resultados e discussão

o Diazepam é um benzodiazepínico ativo há muito tempo com várias propriedades, como anticonvulsivante, ansiolítico, relaxante muscular sedativo e amnésico, mas também é administrado no tratamento de insônia, convulsões febris, estado epiléptico e sintomas de abstinência alcoólica. Pode ser administrado por diferentes vias: por via oral, injeções IV, soluções retais, géis retais e supositórios. No entanto, via oral e IV, embora constituam uma forma simples e rápida de administração, a primeira mostra absorção errática e mais lenta, a segunda, em vez disso, está vinculada à presença de pessoal médico. Com base nestes pressupostos e da consciência de que uma formulação tópica, como supositórios e pessários vaginais, poderia ter um prompt de absorção e rápida de entrada para o sistema nervoso central, uma equipe de urologistas têm proposto pessários vaginais carregado diazepam, como prático, eficaz, e sem efeitos colaterais administração de formulário no tratamento da cistite intersticial. No entanto, uma dose menor de medicamento foi considerada porque o Comitê bioético local destacou a necessidade, em uma fase clínica I, de começar com uma dose baixa, a fim de prever a titulação do medicamento haematic, avaliando e monitorando seus efeitos clínicos e colaterais.

de acordo com a Farmacopeia, duas formulações diferentes de pessários com e sem beta-glucano foram consideradas e configuradas. O Beta-glucano é um polissacarídeo com perfil terapêutico significativo. Propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias e cicatrizantes têm sido atribuídas a este polissacarídeo, e isso representa racional científico sobre seu uso na formulação de pessários vaginais.

a cistite intersticial na verdade é caracterizada por alterações da parede da bexiga com reddenings e ulcerações que o beta-glucano poderia curar. No entanto, o beta-glucano também contribui para dar mais consistência à formulação.

numerosos parâmetros experimentais permitem obter formulações vaginais padronizadas e reprodutíveis: temperatura de hidratação e tempo de gelatina, tempo de sonicação, temperatura de fabricação, adição de diazepam e armazenamento pessário. A configuração das formulações preparadas foi realizada de acordo com as condições do processo relatadas na Tabela 2.

fase Parâmetros de avaliação
Temperatura de cerca de 75°C garante uma fusão completa de todos os excipientes e ausência de agregados
Fabricação Sonicação evita a formação de bolhas de ar (Figura 2(a)) contribuir para a obtenção de uma dispersão homogênea de diazepam em pó em fundida matriz
enchimento do Molde foi realizado pela balança analítica, a fim de uniforme massa de conteúdo em cerca de 3,6 gramas
Armazenamento Óvulos não deve ser exposta à luz solar, e eles devem ser armazenados a 4°C, a fim de preservar o diazepam atividade
Tabela 2
Parâmetros de formulação do processo de fabricação e armazenamento de fase.

os sistemas vaginais, aqui propostos, embora simples de reproduzir, foram caracterizados a partir de uma matriz cada vez mais complexa: uma pequena quantidade de diazepam é suspensa em uma mistura de gelatina, água, glicerina ou/e beta-glucano. Consequentemente, o formulador deve lidar com dois aspectos críticos: a droga não é homogeneamente distribuída em matriz, devido à sua solubilidade moderada em matriz de base. O segundo aspecto é que é difícil determinar a quantidade exata de Ativo presente na formulação.

na Figura 2, foram relatados pessários, obtidos com e sem adição de beta-glucano. As imagens mostram como diferentes formulações podem parecer aparentemente semelhantes devido à presença de gelatina, o que dá uma cor transparente e amarela característica aos lotes. No entanto, é possível observar, no segundo lote, várias bolhas de ar.

por fim, é importante ressaltar que, para todos os lotes, foi registrada uma perda de água, correlacionada ao armazenamento de temperatura. Uma troca de vapor de água entre matriz e ambiente foi hipotetizada.

3.1. Conteúdo de drogas em pessários vaginais

para avaliar o diazepam carregado em pessários, foi estabelecido um método espectrofotométrico. O método proposto para determinação ativa nos comprimidos e ampolas foi adequadamente adaptado às formulações vaginais. De acordo com este método colorimétrico, o diazepam produz um produto intensamente vermelho quando reage com o ácido 3,5-dinitrobenzóico em meio alcalino. O complexo vermelho é chamado de complexo de Meisenheimer, e a reação é chamada de reação de Janovsky .

três curvas de calibração diferentes foram instaladas. Nas Figuras 3(a) e 3 (b) soluções diazepam padrão e solução padrão, mais lotes de placebo (lotes A ou B) foram comparados. Ao comparar as curvas, é possível observar que a matriz, feita de gelatina, beta-glucano e glicerina, é capaz de interferir na determinação do diazepam. De fato, em ambas as figuras, os perfis das curvas não são paralelos, mas tendem a se cruzar. Além disso, as curvas, com adições padrão aos pessários, mostram coeficientes de correlação acima, respectivamente, de 0,9954 e 0,9937.

curvas de calibração são aplicadas para determinar o carregamento de diazepam: A tabela 3 relata o percentual de Medicamentos dos lotes de gelatina e beta-glucano, mostrando, respectivamente, sobre e subestimação do fármaco. No primeiro caso, a perda de água e excipiente, tendo referência à fase de fabricação e armazenamento, explica um percentual maior de diazepam. Por outro lado, o menor em amostras de beta-glucano pode ser explicado pela hipótese de que a estrutura do polissacarídeo se liga à droga.

Carregado diazepam porcentagem uniformidade de Conteúdo (%)
Topo Centro Baixo
Gelatina em lote 32% 31% 37%
Beta-glucan lote 33% 33% 34%
Tabela 3
Carregado de eficiência (%) e avaliação da distribuição do diazepam em lotes de gelatina e beta-glucano.

o Diazepam é um medicamento insolúvel em água e sua incorporação na formulação vaginal depende do processo de preparação. Para atingir o carregamento ideal de diazepam, vários fatores, como excipientes e parâmetros do processo, foram considerados. Em particular, observou-se que 2% do beta-glucano aumenta a viscosidade da massa fundida e, consequentemente, garante uma distribuição homogênea do pó de diazepam. Como é relatado na Tabela 3, de fato, os pessários de gelatina mostram uma maior porcentagem de diazepam em seu fundo devido à tendência de precipitação de drogas. Esse efeito pode estar relacionado à baixa viscosidade desse tipo de formulação.

após a adição do medicamento, a sonicação é um dos principais parâmetros do processo que contribui para evitar a formação de agregados de medicamentos e garantir uma boa distribuição do medicamento.

3.2. avaliação do pH de formulações vaginais

de acordo com muitos pesquisadores e clínicos, a modulação neural e a transmissão da dor no CI são acentuadas pela estimulação direta em ambientes de pH baixo. De fato, nos últimos 20 anos ou mais, agentes alcalinizantes no gerenciamento de sintomas semelhantes à cistite têm sido usados com bons resultados. No entanto, recentemente, vários estudos reavaliaram a relação entre pH urinário e sintomas de cistite, concluindo que não houve relação entre eles para uma variação entre pH 5,0–8,0. Assim, à luz das discussões científicas anteriores, é extremamente importante, na fase pré-clínica, determinar as mudanças de pH da formulação tópica durante sua desagregação.

na Figura 4 são relatados os valores de pH do meio de incubação de pessários. A partir dos números, é evidente que o pH de todas as formulações mantém, logo após 15 minutos, valores para ~5. Esses valores fracamente ácidos são atribuídos à gelatina, obtida a partir da hidrólise alcalina. De fato, os mesmos números mostram um perfil constante até 24 horas.

Figura 4

pH avaliação de pessary lotes em horários programados, incubadas em tampão fosfato 4.2.

3.3. Estudo de liberação In Vitro de Diazepam de pessários

estudo de liberação In vitro foi realizado usando tampão fosfato pH 4,2 como meio preliminar de dissolução, a fim de simular pH fisiológico do ambiente vaginal.

os perfis de liberação de diazepam de pessários vaginais são mostrados na Figura 5. Como é possível observar a partir dos números, os lotes de beta-glucano e gelatina liberam completamente o medicamento em 15 e 25 minutos, respectivamente. Em particular, os pessários de gelatina liberam cerca de 40% de diazepam logo após 2 minutos contra cerca de 8% das amostras de beta-glucano. A figura 5 demonstra também que, provavelmente devido ao mecanismo de inclusão da droga na rede polissacarídica, o beta-glucano permite uma liberação gradual da droga da matriz de acordo com a discussão anterior. Além disso, após a realização do platô, os lotes de gelatina mantêm alto perfil (~100%), enquanto os beta-glucanos mostram valores diminuídos (80%), provavelmente devido a uma interação droga-polissacarídeo presumida.

Figura 5

Diazepam cumulativa perfis de liberação em tampão fosfato pH 4.2.

os perfis de liberação de drogas são acordados com o teste de desagregação anterior (dados não relatados). Na verdade, os pessários de beta-glucano se desagregam completamente aos 30 minutos, 10 minutos a mais do que os de gelatina.

3.4. Recentemente, foi relatado estudo de fotoestabilidade

fotossensibilidade, associado a benzodiazepínicos . O ICH harmonizou a diretriz tripartida 10 e o estado recente da orientação do esboço de FDA que o teste claro deve ser uma parte integrante do teste de esforço. Portanto, é de interesse testar a estabilidade das condições de estresse fotoquímico do diazepam. Gallardo et al. observou-se que, após exposição à luz, Os produtos de degradação se formaram. Com base nessas considerações, todas as formulações vaginais foram submetidas à irradiação UV-visível, a fim de verificar o efeito de triagem do molde no pessário e, portanto, no medicamento.

como é possível observar na Tabela 4, independentemente do tipo de lote, Todas as amostras submetidas a condições aceleradas e armazenadas no molde, apresentam diminuição da quantidade de fármaco devido ao poder de degradação das irradiações no diazepam, mas também, devido a uma possível interação diazepam-embalagem. Na Farmacopeia, é relatado que o cloreto de polivinila, ao ser um constituinte da embalagem de infusão, poderia interagir com o diazepam e, consequentemente, adsorvê-lo.

condição Padrão Acelerada condições
Gelatina de exemplo Formulação
em poliméricos molde
Formulação de vidro (amostra padrão)
Beta-glucan de exemplo Formulação polimérica molde
Formulação de vidro (padrão exemplo)
Tabela 4
Fotodegradação de diazepam depois de raio UV exposição: percentual quantidade de droga em lotes armazenados no molde e em lotes armazenados na fabricação de recipiente (vidro de borosilicato).

Finalmente, é interessante sublinhar que as amostras de beta-glucano mantiveram sua estrutura e forma no final do ensaio, em vez disso, os pessários de gelatina parecem completamente fundidos, provavelmente devido à falta de agente de textura, como beta-glucano. Isso confirma que o polissacarídeo garante uma consistência e uma liberação lenta da droga da formulação, apenas observada acima.

4. Conclusões

neste estudo, um interessante fármaco insolúvel em água para a cura da dor na bexiga na terapia de cistite intersticial foi carregado em uma formulação tópica, simples de administrar e sem efeitos colaterais no sistema central.

em alternativa à fórmula clássica relatada à Farmacopeia oficial, este trabalho sugere pessários vaginais com adição de polissacarídeo com propriedades terapêuticas e tecnológicas notáveis. A escolha da adição de polissacarídeos parece contribuir com sucesso para a realização do manuseio de pessários com boas características organolépticas, quando a droga é homogeneamente distribuída em uma matriz.

além disso, o aparelho de teste de liberação de drogas, projetado em nossos laboratórios, permite simular o estresse mecânico em um ambiente vaginal. Em particular, este aparelho apresenta diferentes vantagens em relação ao teste oficial. Em primeiro lugar, o volume de meio de dissolução necessário e a geometria do sistema asseguram Condições in vivo. Além disso, nessas condições, mesmo uma quantidade extremamente baixa de medicamento pode ser facilmente quantificada.

Apesar de que o meio de dissolução volume é pequeno, mas é coerente com a literatura, óvulos dissolvida e libertada completamente a droga dentro de 30 minutos, garantindo, provavelmente, uma rápida farmacológicas eficácia amostras de alteração em termos de propriedades organolépticas e eficácia farmacológica.

os resultados promissores obtidos neste estudo representam a oportunidade de desenvolver um estudo clínico, quando é possível avaliar sua eficácia terapêutica nos pacientes com cistite intersticial.

conflito de interesses

este trabalho, aqui apresentado, não apresenta conflito de interesses.

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