innovativt tillvägagångssätt för interstitiell cystit: vaginala pessarier laddade Diazepam–en preliminär studie

Abstrakt

Blåssmärta är en karakteristisk störning av interstitiell cystit. Diazepam är välkänt för sin antispasmodiska aktivitet vid behandling av muskelhypertonus. Syftet med detta arbete var att utveckla och karakterisera vaginala pessarier som ett intravaginalt leveranssystem av diazepam för behandling av interstitiell cystit. I synnerhet jämfördes prestandan av två typer av formuleringar, med och utan beta-glukan. I synnerhet rapporterades beredningen av pessarier, enligt det modifierade Pharmacopeia-protokollet, inställningen av analysmetoden för att bestämma diazepam, pH-utvärdering, upplösningsprofil och fotostabilitetsanalys. Resultaten visade att det modifierade protokollet möjliggjorde att få optimala vaginala pessarier, utan luftbubblor, med god konsistens och hantering och med bra pH-profiler. För att bestämma diazepammängden erhölls kalibreringskurvor med goda korrelationskoefficienter med den spektrofotometriska metoden med användning av placebopessarier som matris med tillsats av diazepam standardlösning. Denna metod demonstrerades förnuftig och korrekt för att bestämma mängden läkemedel i satser. Upplösningsprofiler visade en fullständig diazepamfrisättning strax efter 15 minuter, även om betaglukanpessarier släppte läkemedlet mer gradvis. Slutligen utvärderades en möjlig läkemedelsfotodegradering efter förvärrad UV-synlig exponering.

1. Inledning

interstitiell cystit (IC), även känd som smärtsamt blåssyndrom, är en oroande, kronisk blåsstörning av okänd orsak, med symtom på smärta, tryck eller obehag relaterat till urinblåsan och vanligtvis åtföljd av ett frekvent och brådskande behov av att urinera dag och natt . Smärta eller obehag är det viktigaste och försvagande symptomet på denna sjukdom. Det kan upplevas som obehag eller ömhet eller irritation eller brännande känsla i urinblåsan, i form av spasmer i eller runt urinblåsan, eller stickande eller brännande vaginal smärta eller helt enkelt en känsla av tryck på eller i urinblåsan eller en känsla av fullhet även när det bara finns lite urin i urinblåsan. IC smärta kan härröra inte bara från blåsan utan också från närliggande muskler, nerver och till och med hänvisade smärta från andra delar av kroppen . Med tiden lär sig de flesta patienter den subtila skillnaden i symtom mellan en IC-flare orsakad av direkt blåsirritation (dvs., diet) kontra en muskelspasma (dvs sex, körning i bil etc.). Blåsväggirritation har en tendens att skapa mer av en skarp, intensiv smärta. Bäckenbottenmuskelspasmer skapar en djupare, tyngre brännande känsla som kan göra sittande mer obekväma. Nervsmärta kan vara mer elektrisk, varm eller brännande i naturen. Varje potentiell smärtkälla har sina egna symtom och behandlingar.

trots all forskning och studier som har genomförts har det ännu inte hittats någon möjlighet att bota denna sjukdom, och det finns inte heller ett enda läkemedel som är effektivt hos alla patienter. Ändå finns det många olika alternativ att prova. Behandling av IC bör fokusera på smärta och urologiska symtom som brådskande och frekvens. Smärtlindring bör dock spela en viktig roll . Om smärtan är mycket svår och inte svarar på standardbehandling, kan en smärtklinisk remiss vara tillrådligt.

för smärtbehandling har faktiskt många läkemedelsklasser administrerats. Bensodiazepiner (BZDs) anses vara den behandling som valts för akut hantering av svår smärta. BZD: er har en snabb verkan när de levereras till centrala nervsystemet och är säkra . Diazepam är i synnerhet en långverkande bensodiazepin med antikonvulsiva, anxiolytiska, lugnande muskelavslappnande och amnesiska egenskaper. Det har emellertid en kort verkningstid och bör ges intravenöst eller rektalt. I synnerhet är absorptionen efter oral administrering av tabletter vanligtvis långsammare än efter parenteral eller rektal administrering . Istället bör doseringsformer avsedda för rektal administrering inte orsaka irritation, bör visa god retention i den nedre delen av tjocktarmen och bör vara tillräckligt lämpliga för att accepteras av patienten.

enligt dessa överväganden studerade Balkis frisättningen av diazepam från olika konventionella och ihåliga suppositoriebaser och han drog slutsatsen att de bästa resultaten erhölls med användning av glycerol-gelatin och glycerol-PEG1540 som vattenlösliga baser .

för närvarande ordinerar vissa läkare vaginala diazepam (Valium) suppositorier eller tabletter för att lindra smärtan vid dysfunktion i bäckenbotten, interstitiell cystit, vulvarsmärta och sexuell smärta. Detta orsakar mindre dåsighet som en bieffekt än oral valium, men ändå kan det fortfarande ge mild sedering . Doseringen är vanligtvis 5-10 mg valium sammansatt (i en paraffinbas), börjar en gång varje natt och titreras. En alternativ väg till rektal administrering av diazepam kan betraktas som den intravaginala vägen, för att överväga tilläggsbehandling av blåssmärta vid interstitiell cystit. Med tanke på alla ovan nämnda fakta har diazepambelastade vaginala pessarier formulerats och karakteriserats för att föreslå ett innovativt terapeutiskt tillvägagångssätt för smärtsamma symtom, egenskaper hos interstitiell cystit .

i synnerhet har diazepambelastade vaginala pessarier, beskrivna i denna studie, formulerats med beta-glukan-tillsats som aktivt hjälpämne. Enligt litteraturen förhindrar och behandlar beta-glukan mukosit genom sårläkning och vävnadsreorganisation , och denna aspekt är mycket intressant eftersom patienter som drabbats av interstitiell cystit visar en skadad slemhinnor med sår.

2. Material och reagenser

Diazepampulver (DZP) tillhandahölls av FIS-SPA (Italien); sackaros (CM-glukangranulat, SD = 0,85) och gelatin (maskstorlek 20, sats 4767) pellets köptes från Mibelle Biochemistry och Lapi-gelatin s.p.A. Diazepam erhölls med officiellt tillstånd. Alla andra material var av analytisk kvalitet.

2.1. Beredning av DZP vaginala pessarier

vaginala laddade pessarier bereddes genom att hydrera gelatin i vatten över natten. Gelatin upphettades i ett ultraljuds termiskt bad, vid 85 kcal C, tills fullständig fusion. Samtidigt har glycerol och vattenhaltig lösning av sackaros (85 C) upphettats separat och slutligen blandats ihop. blandning av glukan-glycerol tillsattes till smält gelatin och omrördes kraftigt för att erhålla en homogen formulering. Slutligen tillsattes DZP-pulver, och den erhållna formuleringen sonikerades och gjutes i formarna. Placebopessarier har också förberetts med samma procedur utan DZP-beroende. Placebo och laddade pessarier bereddes enligt European Pharmacopeia (7: e upplagan). Alla satser, placebo och laddade, lagrades vid 4 msk C, och de framställdes i tre exemplar.

i Tabell 1 rapporterades satsens sammansättning.

2.2. Läkemedelsinnehåll i vaginala pessarier

DZP-innehåll bestämdes med användning av spektrofotometrisk teknik med extern standardmetod. Analysen utfördes med UV-synlig spektrofotometer (spektrofotometer UV-Vis Agilent 8453). Kalibreringskurvan erhölls genom att överväga placeboprover och fem olika schemalagda koncentrationer av DZP (6,40–87,06 occurg/mL).

laddad pessary (3,6 g) överfördes till injektionsflaska och 4 mL absolut etanol tillsattes, och flaskan placerades i ultraljudsbadet vid 37 kcal C tills fullständig mjukning. Proverna omrördes vid 600 rpm i 15 minuter för att tillåta gelatinutfällning, och sedan 1 mL av suspensionen, överförd till ett mikrorör, har centrifugerats vid 14.000 rpm, vid 24 C i 10 minuter för att säkerställa gelatinseparation till mikrotubes botten.

kolorimetrisk analys utfördes genom tillsats av 0,5 mL supernatant, 1 mL 3,5-dinitrobensoesyra och 0,5 mL 7 m natriumhydroxid . Absorbansen av ta prov mättes på 530 nm.

2.3. Utvärdering av DZP-Distribution i laddade formuleringar

för att utvärdera läkemedelshomogen fördelning i pessarier samlades olika delar av varje prov: bas, kropp och toppmöte. I synnerhet tillsattes 1,2 g av varje del till absolut etanol. Spektrofotometrisk analys bestämdes av det experimentella protokollet som beskrivits ovan.

2.4. Utvärdering av pH i vaginala formuleringar

alla prover, laddade och placebo, blöts i 2 mL fosfatbuffertlösning, pH 4, 2 vid 37 kcal C. Efter schemalagda tider (15, 60 minuter och 4, 6, 24 timmar) utfördes pH-mätningar för att utvärdera eventuell förändring av pH-inkubationsmedium.

2.5. In Vitro-Frisättningsstudie

i vårt laboratorium realiserades en modifierad in vitro-testapparat lämpligt (Figur 1) för att simulera intravaginala tillstånd och att diskriminera formuleringsprestanda. För detta ändamål tilldelades flaskor till lämplig utformad rotor för att garantera planetariumrörelse. I synnerhet fixerades flaskor till konisk rotor med en väldefinierad vinkel. Experimentet inrättades i ett vattenbad vid C.

Figur 1

apparater för in vitro-frisättning: instrument vid rotationsrörelse för att simulera mekanisk stress i en vaginal miljö.

laddade pessarier (3,6 g) hälldes i en glasflaska i närvaro av fosfatbuffert pH 4,2 (2 mL) utsatt för hastighet vid 37 rpm. Vid schemalagda tider (2, 5, 7, 15, 25, och 35 minuter) vätskefasen drogs tillbaka och omrördes i några minuter för att garantera fullständig dispersion av diazepam. Läkemedelsfrisättningsanalyser utfördes med den spektrofotometriska metoden som rapporterats ovan. I synnerhet tillsattes 1 mL absolut etanol till 0,5 mL flytande prov. Efter omrörning och centrifugering drogs 0,5 mL av supernatanten ut för att utföra kolorimetrisk analys. Återtagna alikvoter analyserades spektrofotometriskt vid 530 nm (spektrofotometer UV-Vis Agilent 8453). Alla experiment utfördes i tre exemplar och medelvärden presenterades.

2.6. Fotostabilitetsstudie

Diazepam, enligt European Pharmacopoeia 7: e upplagan, är fotosensibel. Av denna anledning skickades pessarier till artificiellt solljus av Suntest XLS + II (Atlas).

analysen utfördes för att utvärdera den möjliga interaktionen mellan förpackning och formulering. Prover hölls i mögel (primärförpackning) eller i glas (tillverkningsförpackning).

i slutet av studien jämfördes prover i Suntest med standarder lagrade vid rumstemperatur.

instrumentet inrättades enligt standard europeiskt förfarande och exakt enligt följande parametrar: tid: 4 timmar motsvarande 192 timmar solljus, bestrålningskontroll: 300-800 nm, bestrålning W / m2: 750, rumstemperatur: 35 C, svart standardtemperatur (BST): 45 C.

3. Resultat och diskussion

Diazepam är en långaktiv bensodiazepin med flera egenskaper, såsom antikonvulsiv, anxiolytisk, lugnande muskelavslappnande och amnesisk, men det administreras också vid behandling av sömnlöshet, feberkramper, status epilepticus och alkoholabstinenssymptom. Det kan administreras via olika vägar: Oralt, IV-injektioner, rektala lösningar, rektala geler och suppositorier. Men oral och IV-väg, även om de utgör ett enkelt och snabbt administreringssätt, visar den första ojämn och långsammare absorption, den andra är istället bunden av närvaron av medicinsk personal. På grundval av dessa antaganden och medvetenheten om att en topisk formulering, såsom suppositorier och vaginala pessarier, kan ha en snabb absorption och snabb inträde i centrala nervsystemet, har ett expertteam av urologer föreslagit vaginala pessarier laddade diazepam, som praktisk, effektiv och saknar biverkningar administreringsform vid behandling av interstitiell cystit. En lägre dos av läkemedel har emellertid beaktats eftersom lokal bioetisk utskott lyfte fram kravet i en klinisk i-fas att börja med en låg dos för att ge hematisk läkemedelstitrering, utvärdera och övervaka dess kliniska och biverkningar.

enligt Pharmacopoeia övervägdes och sattes två olika formuleringar av pessarier med och utan betaglukan. Betaglukan är en polysackarid med signifikant terapeutisk profil. Antioxidant, antiinflammatoriska och sårläkande egenskaper har tillskrivits denna polysackarid, och detta representerar vetenskapligt rationellt om dess användning i vaginala pessariesformulering.

interstitiell cystit kännetecknas faktiskt av förändringar av blåsväggen med rodnad och sår som Betaglukan skulle kunna läka. Betaglukan bidrar emellertid också till att ge mer konsistens till formuleringen.

många experimentella parametrar gör det möjligt att erhålla standardiserade och reproducerbara vaginala formuleringar: hydrering temperatur och tid för gelatin, ultraljudsbehandling tid, tillverkning temperatur, diazepam tillsats, och pessary Lagring. Uppställningen av beredda formuleringar har utförts enligt de processbetingelser som redovisas i Tabell 2.

Inställningsfas parametrar utvärdering
temperatur på ca 75 C C garanterar en fullständig fusion av alla hjälpämnen och frånvaro av aggregat
tillverkning ultraljudsbehandling undviker luftbubblor bildning(Figur 2 (A)) bidrar till att erhålla en homogen dispersion av diazepam pulver i smält matris
formfyllning har utförts med analytisk balans för att enhetlig massinnehåll på ca 3,6 gram
förvaring Pessaries får inte utsättas för solljus och de måste förvaras vid 4 kg C för att bevara diazepamaktivitet
Tabell 2
parametrar för formuleringsprocessen i tillverknings-och lagringsfasen.

vaginala system, här föreslagna, även om de var enkla att reproducera, kännetecknades av en matris mer och mer komplex: en liten mängd diazepam suspenderas i en blandning av gelatin, vatten, glycerin eller/och beta-glukan. Följaktligen måste formuleraren hantera två kritiska aspekter: läkemedlet distribueras inte homogent i matris på grund av dess måttliga löslighet i basmatris. Den andra aspekten är att det är svårt att bestämma den exakta mängden aktiv närvarande i formulering.

i Figur 2 rapporterades pessarier, erhållna med och utan tillsats av betaglukan. Bilder visar hur olika formuleringar kan verka tydligen lika på grund av gelatinnärvaro som ger en karakteristisk transparent och gul färg till satserna. Det är emellertid möjligt att i den andra satsen observera flera luftbubblor.

slutligen är det viktigt att understryka att för alla partier har en vattenförlust, korrelerad med temperaturlagring, registrerats. En vattenånga utbyte mellan matris och miljö antogs.

3.1. Läkemedelsinnehåll i vaginala pessarier

för att utvärdera diazepam laddad i pessarier inrättades en spektrofotometrisk metod. Metoden som föreslogs för aktiv bestämning i tabletterna och ampullerna var lämpligt anpassad till vaginala formuleringar. Enligt denna kolorimetriska metod ger diazepam intensivt rödfärgad produkt när den reagerar med 3,5-dinitrobensoesyra i alkaliskt medium. Det röda komplexet kallas Meisenheimer-komplexet, och reaktionen kallas Janovsky-reaktionen .

tre olika kalibreringskurvor monterades. I figurerna 3(A) och 3 (b) standard diazepamlösningar och standardlösning har fler placebosatser (a-satser eller B-satser) jämförts. Genom att jämföra kurvor är det möjligt att observera att matrisen, gjord av gelatin, beta-glukan och glycerin, kan störa diazepambestämningen. Faktum är att i båda figurerna är kurvprofilerna inte parallella men de tenderar att korsa. Dessutom visar kurvor, med standardtillägg till pessarier, korrelationskoefficienter ovan respektive 0,9954 och 0,9937.

kalibreringskurvor tillämpas för att bestämma diazepambelastning: Tabell 3 rapporterar läkemedelsprocent av gelatin och beta-glukan satser, visar, respektive, över och underskattning av läkemedel. I det första fallet förklarar vatten och hjälpämne förlust, med hänvisning till tillverknings-och lagringsfas, en högre andel diazepam. Å andra sidan kan det lägre i beta-glukanprover förklaras genom att hypotesera att polysackaridstrukturen binder läkemedel.

laddad diazepam procent innehåll enhetlighet (%)
topp Central botten
Gelatin sats 32% 31% 37%
sats av Beta-glukan 33% 33% 34%
tabell 3
belastad verkningsgrad ( % ) och distribution utvärdering av diazepam i gelatin och betaglukan partier.

Diazepam är ett vattenolösligt Läkemedel, och dess införlivande i vaginal formulering är beroende av beredningsprocessen. För att uppnå optimal diazepambelastning övervägdes flera faktorer, såsom hjälpämnen och processparametrar. I synnerhet observerades att 2% av betaglukan ökar viskositeten hos smält massa och följaktligen garanterar den en homogen fördelning av diazepampulver. Som det rapporteras i tabell 3 visar gelatinpessarier faktiskt en högre diazepamprocent på botten på grund av drogutfällningstendens. Denna effekt kan relateras till låg viskositet av denna formuleringstyp.

efter läkemedelstillsats är ultraljudsbehandling en av de viktigaste processparametrarna som bidrar till att undvika bildning av läkemedelsaggregat och för att säkerställa en god läkemedelsfördelning.

3.2. pH-utvärdering av vaginala formuleringar

enligt många forskare och kliniker accentueras neuralmodulering och överföring av smärta i IC genom direkt stimulering i låga pH-miljöer. Under de senaste 20 åren eller mer har alkaliserande medel för att hantera cystitliknande symtom använts med goda resultat. Men nyligen omvärderade flera studier förhållandet mellan urin pH och cystitissymptom och drog slutsatsen att det inte fanns något samband mellan dem för ett intervall mellan pH 5,0–8,0. Mot bakgrund av de tidigare vetenskapliga diskussionerna är det således extremt viktigt i preklinisk fas att bestämma pH-förändringar av topisk formulering under deras disaggregering.

i Figur 4 pH-värden för pessaries inkubationsmedium rapporteras. Av figurerna är det uppenbart att pH för alla formuleringar upprätthåller, strax efter 15 minuter, värden till ~5. Dessa svagt syravärden hänför sig till gelatin, erhållen från alkalisk hydrolys. Faktum är att samma siffror visar en konstant profil fram till 24 timmar.

Figur 4

pH-utvärdering av pessary-satser vid schemalagda tider, inkuberade i fosfatbuffert 4.2.

3.3. In Vitro-Frisättningsstudie av Diazepam från Pessaries

in vitro-frisättningsstudie utfördes med användning av fosfatbuffert pH 4,2 som preliminärt upplösningsmedium för att simulera Fysiologiskt pH i vaginal miljö.

Frisättningsprofiler av diazepam från vaginala pessarier visas i Figur 5. Som det är möjligt att observera från figurerna frisätter beta-glukan och gelatinpartier helt läkemedlet vid 15 respektive 25 minuter. I synnerhet frigör gelatinpessarier cirka 40% diazepam strax efter 2 minuter mot cirka 8% av betaglukanproverna. Figur 5 visar också att betaglukan, troligen på grund av mekanismen för läkemedelsinkludering i polysackaridnätverket, tillåter en gradvis frisättning av läkemedlet från matrisen enligt föregående diskussion. Dessutom, efter platåprestation, upprätthåller gelatinsatser hög profil (~100%), medan beta-glukan visar värden minskar (80%), troligen på grund av en antagen läkemedelspolysackaridinteraktion.

Figur 5

diazepam kumulativa frisättningsprofiler i buffertfosfat pH 4.2.

Läkemedelsfrisättningsprofiler är överens med tidigare disaggregationstest (data rapporteras inte). Faktum är att betaglukanpessarier delas upp helt på 30 minuter, 10 minuter mer än gelatin.

3.4. Fotostabilitetsstudie

ljuskänslighet, associerad med bensodiazepiner, har nyligen rapporterats . Ich Harmonized Tripartite Guideline 10 och senaste FDA-utkastet till vägledning anger att ljusprovning bör vara en integrerad del av stresstestet. Därför är det av intresse att testa stabiliteten hos diazepam fotokemiska stressförhållanden. Gallardo et al. observerade att, efter ljus exposition, nedbrytningsprodukter bildas. På grundval av dessa överväganden har alla vaginala formuleringar underkastats UV-synlig bestrålning för att verifiera screeningseffekten av mögel på pessary och, så, på läkemedel.

som det är möjligt att observera i Tabell 4, oberoende av batchtyp, alla prover som skickas till accelererade förhållanden och lagras i mögel, visar de en minskning av läkemedelsmängden på grund av nedbrytningskraft av bestrålning på diazepam, men också på grund av en möjlig diazepam-förpackningsinteraktion. I Pharmacopeia rapporteras att polyvinylklorid, när den är en beståndsdel i infusionsförpackningen, kan interagera med diazepam och följaktligen adsorbera den.

standardtillstånd accelererade förhållanden
Gelatinprov formulering
i polymerform
formulering i glas (standardprov)
Betaglukanprov formulering i polymerform
formulering i glas (standard prov)
Tabell 4
Fotodegradering av diazepam efter UV-strålningsexponering: procentuell mängd läkemedel i satser lagrade i mögel och i satser lagrade i tillverkningsbehållare (borosilikatglas).

slutligen är det intressant att understryka att betaglukanprover har behållit sin struktur och form i slutet av analysen, istället verkar gelatinpessarier helt smälta, troligen på grund av bristen på texturmedel, som Betaglukan. Detta bekräftar att polysackarid garanterar en konsistens och en långsam frisättning av läkemedel från formulering, som just observerats ovan.

4. Slutsatser

i denna studie har ett intressant vattenolösligt läkemedel för blåsans smärthärdning vid interstitiell cystitbehandling laddats i en topisk formulering, enkel att administrera och utan biverkningar på centrala systemet.

i alternativ till klassisk formel rapporterad till officiell Pharmacopeia, föreslår detta arbete vaginala pessarier med tillsats av polysackarid med anmärkningsvärda terapeutiska och tekniska egenskaper. Valet av polysackaridtillsats verkar bidra framgångsrikt till att hantera pessarier med goda organoleptiska egenskaper, när läkemedlet distribueras homogent i en matris.

Dessutom tillåter läkemedelsfrisättningstestapparaten, utformad i våra laboratorier, att simulera mekanisk stress i en vaginal miljö. I synnerhet presenterar denna apparat olika fördelar med avseende på officiellt test. Först och främst volymen av upplösningsmedium som krävs och systemgeometrin säkerställer in vivo-förhållanden. Vidare kan även extremt låg läkemedelsmängd under dessa förhållanden lätt kvantifieras.

trots att upplösningsmediumvolymen är liten men sammanhängande med litteraturen, löste pessaries och släppte läkemedlet helt inom 30 minuter, vilket garanterar förmodligen en snabb farmakologisk effekt prover förändring i termer av organoleptiska egenskaper och farmakologisk effekt.

de lovande resultaten som erhållits i denna studie representerar möjligheten att utveckla en klinisk studie när det är möjligt att utvärdera dess terapeutiska effekt på de interstitiella cystitpatienterna.

intressekonflikt

detta arbete, här presenteras, har ingen intressekonflikt.

Lämna ett svar

Din e-postadress kommer inte publiceras.